美國(guó)紅魚(yú)和真鯛卵黃原蛋白的分離純化及在內(nèi)分泌干擾物篩選中的應(yīng)用.pdf

1、近年來(lái),內(nèi)分泌干擾物對(duì)野生動(dòng)物和人類的危害已成為一個(gè)全球關(guān)注的重大問(wèn)題,進(jìn)行生物標(biāo)志物的研究、發(fā)展快速可靠的內(nèi)分泌擾亂物質(zhì)篩選和評(píng)價(jià)方法具有重要意義。本文選擇兩種海洋魚(yú)類美國(guó)紅魚(yú)和真鯛,進(jìn)行卵黃原蛋白(VTG)的分離純化和電泳性質(zhì)研究,并針對(duì)國(guó)內(nèi)廣泛使用的農(nóng)藥久效磷,以美國(guó)紅魚(yú)幼魚(yú)為模型生物,以VTG的產(chǎn)生建立有機(jī)磷農(nóng)藥內(nèi)分泌擾亂效應(yīng)的篩選體系。同時(shí),為了全面深入探討久效磷對(duì)機(jī)體的損害,研究了其對(duì)美國(guó)紅魚(yú)肝、腎、鰓、腸組織顯微結(jié)構(gòu)的影響

2、。 腹腔注射0.02 mg/gBW 17β-雌二醇,誘導(dǎo)美國(guó)紅魚(yú)和真鯛一周后取尾靜脈血,離心分離得到的血漿經(jīng)Sephacryl S-300 high resolution分子篩和DEAESepharose fast flow離子交換分離,得到純化的卵黃原蛋白。經(jīng)常規(guī)聚丙烯酰胺凝膠電泳,考馬斯亮藍(lán)染色、糖、磷、脂的特征性基團(tuán)染色及分子量計(jì)算的結(jié)果表明:17β-雌二醇誘導(dǎo)美國(guó)紅魚(yú)產(chǎn)生了分子量為344kDa和247kDa的兩種VTG,

3、誘導(dǎo)真鯛產(chǎn)生了分子量為455kDa的VTG。以SDS-PAGE方法得出美國(guó)紅魚(yú)VTG三種亞基的分子量為152kDa、133 kDa、118 kDa,真鯛VTG的兩種亞基分子量為220和88kDa。 以0.01和0.1 mg L<'-1>的久效磷暴露美國(guó)紅魚(yú)幼魚(yú)21天,各暴露組均誘導(dǎo)了幼魚(yú)VTG的產(chǎn)生,暴露組幼魚(yú)血漿總蛋白含量和血漿鈣離子含量比對(duì)照組均明顯提高,兩個(gè)暴露組相比,高濃度組鈣離子含量也明顯高于低濃度組(p<0.05)。