過(guò)敏性休克小鼠體內(nèi)NO含量、NOS的活性與Eotaxin的表達(dá)及其法醫(yī)學(xué)意義.pdf

1、目的：觀察組胺和一氧化氮(nitric oxide，NO)在過(guò)敏性休克小鼠肺組織中隨時(shí)間變化的規(guī)律，探討NO及嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子(Eotaxin)在過(guò)敏性休克中的作用，試圖為過(guò)敏性猝死的法醫(yī)學(xué)鑒定提供可靠的形態(tài)學(xué)依據(jù)。 方法：(1)將小鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組采用卵蛋白致敏小鼠，建立過(guò)敏性休克模型。分別于休克不同時(shí)間段(休克前、休克后0.5h、休克后12h、休克后24h、休克后48h)提取小鼠肺組織；(2)采用Shor

2、e等熒光測(cè)定法并加以改良測(cè)定肺組織中的組胺含量隨休克時(shí)間的變化；(3)采用硝酸鹽還原法檢測(cè)肺組織中NO含量隨休克時(shí)間變化；(4)通過(guò)血管通透性測(cè)定實(shí)驗(yàn)，證實(shí)NO與血管的通透性升高有直接的關(guān)系；(5)應(yīng)用酶組織化學(xué)技術(shù)對(duì)一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)染色；(6)應(yīng)用免疫組化SABC法對(duì)Eotaxin進(jìn)行染色，并用BI-2000計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行圖像分析，計(jì)算陽(yáng)性積分光密度值(IOD)。 結(jié)果

3、：(1)致敏組動(dòng)物在致敏原激發(fā)前肺組織中組胺含量明顯高于正常對(duì)照組(P<0.01)。致敏原激發(fā)時(shí)即刻迅速下降，低于正常對(duì)照組，僅為激發(fā)前的40％，差異非常顯著。以后呈逐漸回升趨勢(shì)，12h以后即高于正常對(duì)照組，48h后回升為激發(fā)前的95％，基本接近于激發(fā)前水平。而正常對(duì)照組動(dòng)物組織中組胺含量則始終無(wú)明顯變化。(2)致敏組動(dòng)物在致敏原激發(fā)前肺組織中NO含量明顯高于正常對(duì)照組(P<0.01)。致敏原激發(fā)時(shí)即刻迅速下降，低于正常對(duì)照組，僅為激發(fā)

4、前的49％，差異非常顯著。以后呈逐漸回升趨勢(shì)，12h以后即高于正常對(duì)照組，48h后回升為激發(fā)前的96％，基本接近于激發(fā)前水平。而正常對(duì)照組動(dòng)物組織中NO含量則始終無(wú)明顯變化。(3)NOS酶組織化學(xué)染色顯示：實(shí)驗(yàn)組為陽(yáng)性染色，表明當(dāng)過(guò)敏性休克發(fā)生時(shí)，NOS的活性大大增強(qiáng)。(4)IHC結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組Eotaxin表達(dá)明顯增加。 結(jié)論：過(guò)敏性休克時(shí)，小鼠肺組織內(nèi)組胺和NO的含量在過(guò)敏性休克發(fā)病過(guò)程有著動(dòng)態(tài)的變化，經(jīng)統(tǒng)計(jì)

5、學(xué)分析，過(guò)敏性休克小鼠肺組織中組胺含量與NO含量呈正相關(guān)，且相關(guān)性非常顯著，而且通過(guò)血管通透性實(shí)驗(yàn)也證實(shí)NO與血管通透性升高有直接的關(guān)系，為進(jìn)一步應(yīng)用酶組織化學(xué)對(duì)NOS染色來(lái)診斷過(guò)敏性休克的發(fā)生提供了實(shí)驗(yàn)上的支持。并且發(fā)現(xiàn)隨著過(guò)敏性休克發(fā)生，小鼠肺組織中的Eotaxin表達(dá)明顯增加，與對(duì)照組相比有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。因此，應(yīng)用酶組織化學(xué)技術(shù)對(duì)NOS染色和免疫組化技術(shù)對(duì)Eotaxin進(jìn)行染色，可以為法醫(yī)學(xué)過(guò)敏性休克急死提供客觀的輔助診斷依據(jù)