草原龍膽耐鹽相關(guān)基因群的表達分析.pdf

1、草原龍膽(Eustoma grandiflorum)屬龍膽科草本植物，是優(yōu)良的鮮切花材料，它具有一定的耐鹽性，在pH9鹽堿地中，植株仍然可以完成生活史。本試驗的目的是通過抑制消減雜交技術(shù)結(jié)合cDNA芯片技術(shù)分離草原龍膽鹽脅迫誘導基因及耐鹽相關(guān)基因群。抑制消減文庫采用鹽處理1 h、3 h、6 h條件下草原龍膽等量混合的mRNA做為tester，未處理條件下草原龍膽的mRNA做為driver。 將抑制消減雜交第2次PCR的產(chǎn)物連接至

2、pGEM-T載體中，隨后轉(zhuǎn)化到JM109感受態(tài)細胞，經(jīng)藍白斑篩選、培養(yǎng)后提取質(zhì)粒DNA。應用測序試劑盒(Amersham)進行質(zhì)粒DNA測序：PCR反應，產(chǎn)物經(jīng)純化后在MegaBACE 500測序儀上測序。得出的序列經(jīng)SeqClust2.1軟件去除冗余。結(jié)果共得到1153條200bp以上的序列，平均長度為375bp，去除載體和冗余序列，得到658條非重復序列。文庫的冗余度為42.9％。 將得到的658條序列進行GO分類，在生物學

3、途徑中分為有絲分裂檢查點、類泛素化蛋白修飾、氧化脅迫反應、轉(zhuǎn)運、電子傳遞等14類；分子功能中分為過氧化氫酶活性、催化活性、環(huán)氧化物酶活性、單氧化酶活性、谷胱甘肽脫氫酶活性等21類；在細胞組件中分為線粒體、葉綠體、過氧化物酶體、乙醛酸循環(huán)體、細胞核等10類。 以”primer l”和“primer-2R”為引物，通過PCR的方法將以上獲得的658個非重復基因片段從文庫的質(zhì)?？寺≈袛U增出來用于芯片的制作。分別用Cy3、Cy5熒光染料