瀕危藥用植物杜仲產(chǎn)活性成分內(nèi)生真菌的研究.pdf

1、選用珍稀藥用植物杜仲，采用常規(guī)的真菌分離方法，從中分離出了44株內(nèi)生真菌，并以此為對(duì)象進(jìn)行了以下研究工作。 根據(jù)黃酮類和環(huán)烯醚萜類化合物所具有的顏色反應(yīng)，初步篩選出可能生產(chǎn)黃酮類化合物的菌株3株--DZ2、DZY5、DZ11。進(jìn)一步通過(guò)紫外-可見(jiàn)光光譜掃描，并檢測(cè)其產(chǎn)物穩(wěn)定性，最終確定菌株DZ11可能產(chǎn)黃酮類化合物--槲皮素，并且產(chǎn)量相對(duì)穩(wěn)定，故作為下一步的實(shí)驗(yàn)菌株。 繪制DZ11菌株的生長(zhǎng)曲線和槲皮素產(chǎn)量的變化曲線，通

2、過(guò)紫外分光光度法和rLC法測(cè)定槲皮素的最高產(chǎn)量，分別為0.4118mg/L和0.340mg/L。利用HPLC法分析發(fā)現(xiàn)DZ11菌株所產(chǎn)槲皮素在發(fā)酵液和菌絲體內(nèi)都存在，但菌絲體內(nèi)含量相對(duì)較少。通過(guò)常規(guī)濕法裝柱，對(duì)DZ11菌株發(fā)酵液進(jìn)行柱層析分離，得到6種不同Rf值的成分，其中第5部分有著與槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品相同的紫外.可見(jiàn)光光譜。經(jīng)再次純化，通過(guò)質(zhì)譜檢測(cè)其[M+H]+的m/z為303.38，與槲皮素的分子量302.23正好相符。再對(duì)照樣品和槲皮

3、素標(biāo)準(zhǔn)品的紅外吸收?qǐng)D譜，發(fā)現(xiàn)它們的紅外光譜圖幾乎相同，也就是說(shuō)明它們含有相同的結(jié)構(gòu)基團(tuán)或化學(xué)鍵。由此確定DZ11菌株所產(chǎn)的活性物質(zhì)中含有槲皮素。 通過(guò)對(duì)不同固體培養(yǎng)基中菌落的生長(zhǎng)速率和長(zhǎng)勢(shì)分析，發(fā)現(xiàn)在豆芽汁培養(yǎng)基上不但菌絲生長(zhǎng)較快而且菌絲較為濃密。通過(guò)對(duì)不同液體培養(yǎng)基中DZ11的生物量和槲皮素產(chǎn)生量的對(duì)比，篩選出適合DZ11菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)物槲皮素合成的豆芽汁液體培養(yǎng)基。在基本液體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，通過(guò)單因素分析實(shí)驗(yàn)，確定實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵D

4、Z11菌株的最佳碳源、氮源、PH值和溫度分別是蔗糖、脲、7.0和28℃。通過(guò)正交試驗(yàn)，得出適合菌絲生長(zhǎng)的培養(yǎng)基為：把豆芽汁液體培養(yǎng)基中的蔗糖量改為25g/L，添加脲2g/L，裝量為120ml/300ml；適合槲皮素積累的培養(yǎng)基的為：把豆芽汁液體培養(yǎng)基的蔗糖量改為30g/L，添加脲2.5g/L，裝量為100ml/300ml。 根據(jù)DZ11菌株的顯微結(jié)構(gòu)特征，對(duì)DZ11菌株進(jìn)行了分類，初步確定為真菌門，半知菌類，腔孢綱，球殼孢目，球