基于液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的酸棗仁多組分分析與體外代謝研究及連翹心質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立.pdf

1、酸棗仁為鼠李科植物酸棗Ziziphus jujuba Mill. var. spinosa（Bunge） Hu ex H. F. Chou的干燥成熟種子，味甘、酸，性平，具有養(yǎng)肝、寧心、安神、斂汗之功能，用于虛煩不眠、驚悸多夢、體虛多汗、津傷口渴等癥，為傳統(tǒng)的鎮(zhèn)靜安神良藥。中藥多組分測定有助于全面控制藥材質(zhì)量，本研究采用HPLC-MS/MS法同時(shí)測定酸棗仁藥材中9種化學(xué)成分，為酸棗仁藥材的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。同時(shí)，建立人肝微粒體體外溫

2、孵模型，應(yīng)用UHPLC-Q-TOF-MS法鑒定斯皮諾素在人肝微粒體中的代謝產(chǎn)物，推測產(chǎn)物結(jié)構(gòu)及裂解途徑，為斯皮諾素的藥物代謝研究提供理論支持。此外，利用FDA推薦的特異性探針底物研究斯皮諾素對人肝微粒體細(xì)胞色素P450酶7種亞型的抑制作用，評估在體外代謝體系中斯皮諾素對CYP450酶的抑制程度，從而預(yù)測其在體內(nèi)可能引發(fā)的藥物代謝相互作用，為臨床安全用藥提供相關(guān)信息。連翹心為木犀科植物連翹Forsythia suspensa（Thunb.

3、）Vahl的干燥成熟種子，用于治療高熱煩躁、神昏譫語、夜不安眠等癥。本研究制訂了連翹心的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，從性狀、鑒別（顯微和薄層）、檢查（水分、灰分和浸出物）、含量測定（揮發(fā)油和連翹酯苷 A）等方面對連翹心的質(zhì)量進(jìn)行了全面監(jiān)控。同時(shí)，建立HPLC-MS/MS法同時(shí)測定連翹心藥材中8種化學(xué)成分的含量，為連翹心藥材的質(zhì)量控制及開發(fā)應(yīng)用提供參考。本研究分為五個(gè)部分：
　　第一部分：HPLC-MS法同時(shí)測定酸棗仁中9種化學(xué)成分的含量。
　

4、　目的：建立HPLC-MS/MS法同時(shí)測定酸棗仁中酸棗仁皂苷A、酸棗仁皂苷B、斯皮諾素、白樺脂酸、白樺脂醇、蘆丁、芹菜素、橙皮苷和柚皮苷的含量。
　　方法：采用Sapphire C18柱（150 mm×4.6 mm，5μm），以水（1 mmol·L-1乙酸銨-0.1％的甲酸）-乙腈溶液為流動相進(jìn)行梯度洗脫，體積流量1 mL·min-1，進(jìn)樣量10μL，柱溫30℃；采用電噴霧離子源進(jìn)行負(fù)離子模式監(jiān)測，多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）用于定量

5、分析，源噴射電壓為?4500 V，離子源溫度為650℃。
　　結(jié)果：9種成分的峰面積和質(zhì)量濃度在測定的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)均具有良好的線性關(guān)系，加樣回收率為98.0%-101.5%，精密度 RSD值為0.03%-0.74%。
　　結(jié)論：本法簡便、快速、靈敏度高、專屬性好，可用于酸棗仁中9種化學(xué)成分的測定。
　　第二部分：斯皮諾素在人肝微粒體中的代謝研究。
　　目的：建立人肝微粒體體外孵育模型，利用UHPLC-Q-TOF

6、-MS法，對斯皮諾素在人肝微粒體中的代謝產(chǎn)物進(jìn)行鑒定。
　　方法：采用Poroshell120 EC-C18色譜柱（2.1×100 mm，2.7μm），以乙腈-0.1%乙酸水溶液為流動相進(jìn)行梯度洗脫，流速為300μL·min-1；進(jìn)樣量3μL。采用負(fù)離子模式進(jìn)行監(jiān)測，電噴霧離子源，源溫度為550℃，質(zhì)量掃描范圍為m/z100-1000。
　　結(jié)果：共鑒定出斯皮諾素在人肝微粒體中的8個(gè)代謝產(chǎn)物，并對ESI-MS負(fù)離子模式下斯皮

7、諾素可能的裂解途徑進(jìn)行了推測，未能檢測到葡萄糖醛酸化代謝產(chǎn)物。
　　結(jié)論：本研究應(yīng)用UHPLC-Q-TOF-MS法測定斯皮諾素在人肝微粒體中的代謝產(chǎn)物，方法簡便、快速。
　　第三部分：斯皮諾素對人肝微粒體P450酶的抑制作用。
　　目的：建立UHPLC-Q-TOF-MS法研究斯皮諾素對人肝微粒體細(xì)胞色素P450酶7種亞型（CYP1A1、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4

8、）的體外抑制作用。
　　方法：采用 ESI正離子檢測模式測定7種探針底物代謝物（他克寧1-羥化、安非他酮-羥化、阿莫地喹N-脫乙基、雙氯芬酸4'-羥化、S-美芬妥英4'-羥化、右美沙芬O-脫甲基和咪達(dá)唑侖1-羥化）的生成量，計(jì)算IC50值，分別代表7種酶的代謝活性。
　　結(jié)果：斯皮諾素對人肝微粒體CYP1A1、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和 CYP3A4無抑制作用，其 IC50值分別

9、為1714μmol·L-1、1158μmol·L-1、226.1μmol·L-1、2288μmol·L-1、80.59μmol·L-1、101.1μmol·L-1和1119μmol·L-1。
　　結(jié)論：該分析方法靈敏、準(zhǔn)確、可靠，斯皮諾素對人肝微粒P450酶的7種亞型無抑制作用，代謝性藥物相互作用發(fā)生的可能性較小。
　　第四部分：連翹心質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究。
　　目的：研究并建立連翹心的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為不同來源的連翹心提供質(zhì)量控

10、制依據(jù)。
　　方法：參照連翹的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并結(jié)合連翹心的特點(diǎn)，從性狀、鑒別、檢查、含量測定等方面制定連翹心的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果：建立了連翹心的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)論：連翹心質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立，有助于其進(jìn)行質(zhì)量控制，并為相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的建立提供依據(jù)。
　　第五部分：HPLC-MS法同時(shí)測定連翹心中8種化學(xué)成分的含量。
　　目的：建立HPLC-MS/MS法同時(shí)測定連翹心中連翹酯苷A、連翹苷、連翹脂素、蘆丁、槲皮素、異槲皮苷、

11、阿魏酸和橙皮苷的含量。
　　方法：色譜柱為Diamonsil C18柱（150 mm×4.6 mm，5μm），流動相為甲醇-0.1%甲酸水（v/v）溶液，梯度洗脫，體積流量800μL·min-1，進(jìn)樣量10μL；質(zhì)譜采用電噴霧離子源（ESI源），負(fù)離子模式監(jiān)測，源噴射電壓?4500 V，離子源溫度650℃，定量分析采用多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）。
　　結(jié)果：連翹心在測定的濃度范圍內(nèi)峰面積和濃度均呈良好的線性關(guān)系，加樣回收率為9