蘇木化學(xué)成分及其絕對生物利用度研究.pdf

1、蘇木(Caesalpinia sappan L.)，是一種豆科小喬木植物。中藥蘇木(Sappan Lignum)來源于植物蘇木(Caesalpinia sappan L.)的干燥心材。在傳統(tǒng)中醫(yī)領(lǐng)域，蘇木常應(yīng)用于痛經(jīng)的治療，并由于具有止血抗炎等方面功效而被廣泛應(yīng)用。在長期的蘇木藥理活性研究中，發(fā)現(xiàn)其大量顯著的藥理活性。蘇木成分復(fù)雜，以物質(zhì)結(jié)構(gòu)基本骨架特點為分類依據(jù)，可將蘇木中的化合物大致分為五種類型，分別是蘇木素類、原蘇木素類、高異黃酮

2、類、蘇木查爾酮類和苯丙素類等。
　　本研究應(yīng)用超高效液相色譜-線性離子阱-軌道離子阱質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(u-HPLC-LTQ-Orbitrap-MSn)，建立了一種簡單精確高效的方法，用于分離和鑒定蘇木水提液中復(fù)雜且多的化學(xué)成分。采用Thermo Hypersil Gold C18 column(2.1mm×100mm,1.9μm)色譜柱，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2％甲酸水溶液和甲醇兩種流動相進(jìn)行梯度洗脫，通過在線性離子阱中的碎裂作用，獲得多級質(zhì)

3、譜碎片，并由軌道離子阱檢測碎片信息，最終輸出高分辨數(shù)據(jù)，結(jié)合蘇木中主要化學(xué)成分的裂解規(guī)律、特征性離子碎片并參考文獻(xiàn)資料，對蘇木水提液中的主峰進(jìn)行指認(rèn)和鑒定。結(jié)果可得，在蘇木水提液中有31種不同化學(xué)成分，其中17種物質(zhì)被初步推測鑒定出來，14種物質(zhì)文獻(xiàn)未報道。該分析過程在36 min內(nèi)完成。由此可見，u-HPLC-LTQ-Orbitrap-MSn技術(shù)具有簡單高效的特點，可為分析其他中藥材中復(fù)雜化學(xué)成分鑒定提供參考。
　　其次，本研究

4、建立了一種超高效液相(UPLC)法，同時測定蘇木中兩種重要成分，巴西蘇木素及原蘇木素B的含量。采用UPLC-PDA方法，色譜柱為ACQUICTY UPLC HSS T3(2.1mm×100mm，1.8μm)，以甲醇-冰醋酸水溶液（質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.2%）的二相溶液體系為流動相，7.5min時間完成梯度洗脫的過程，柱溫40℃，流量為0.3mL/min，檢測波長為280nm。進(jìn)樣量為10μL。結(jié)果可見，色譜圖中，兩個目標(biāo)成分的色譜峰均達(dá)到基線分離

5、，在0.195～200μg/mL范圍內(nèi)，兩種被測物質(zhì)的質(zhì)量濃度與峰面積均有良好的線性關(guān)系，R2均為0.9998；平均回收率分別為103.89%、99.83%，RSD為1.26%、1.87%。由此可知，相比HPLC，UPLC的應(yīng)用明顯提高了藥物分析的速度，縮短了含量測定的時間，在同時測定兩種及以上成分的應(yīng)用上具有一定優(yōu)勢，具備更高的靈敏度，可為今后蘇木質(zhì)量檢測方法建立了新標(biāo)準(zhǔn)提供參考。
　　另外，本研究應(yīng)用超高效液相串聯(lián)質(zhì)譜法(Ul

6、tra Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrum/Mass Spectrum)，研究原蘇木素B(Protosappanin B)及巴西蘇木素(Brazilin)大鼠體內(nèi)的絕對生物利用度及其藥代動力學(xué)特征參數(shù)。其中，原蘇木素B質(zhì)譜負(fù)離子檢測通道為303.26＞231.13，色譜柱采用ACQUICTY UPLC BEH Symmetry Shield RP-18(2.1×100mm，1.

7、7μm)，考察大鼠經(jīng)尾靜脈注射(3mg·kg-1)或灌胃(15mg·kg-1)給予原蘇木素B后大鼠血樣中藥物濃度變化的情況；巴西蘇木素質(zhì)譜負(fù)離子檢測通道為285.23＞163.21，色譜柱采用ACQUICTY UPLC HSS T3(2.1mm×100mm，1.8μm)，考察大鼠經(jīng)靜脈注射(3mg·kg-1)或灌胃(30mg·kg-1)給予巴西蘇木素后的大鼠血樣中藥物濃度變化的情況。流動相均為乙腈-醋酸銨(5mM)水溶液，設(shè)置梯度洗脫全

8、過程為5min；柱溫25℃，體積流量為0.3mL·min-1，進(jìn)樣量為10μL。利用WinNonLin3.3軟件計算藥動學(xué)參數(shù)，并根據(jù)藥時曲線下面積AUC0-∞和給藥劑量，計算其絕對生物利用度。原蘇木素B在0.49-2000ng·mL-1范圍內(nèi)線性良好(R2=0.998)；巴西蘇木素在3.90-1000ng·mL-1范圍內(nèi)線性良好(R2=0.998)；結(jié)果可見，兩種藥物的方法學(xué)考察均符合要求，具體包括了日內(nèi)精密度、日間精密度及提取回收率