增液湯調(diào)控神經(jīng)肽VIP的表達(dá)治療干燥綜合征的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　探討增液湯治療干燥綜合征的中醫(yī)理論基礎(chǔ);探討增液湯治療干燥綜合征是否通過上調(diào)神經(jīng)肽VIP的表達(dá)發(fā)揮作用，從而調(diào)節(jié)該疾病Th1/Th2、Th17/Treg免疫失衡及AQP5表達(dá)異常。
　　方法：
　　理論研究分成兩個(gè)部分，分別梳理相關(guān)文獻(xiàn)探討干燥綜合征的病因與病機(jī)。實(shí)驗(yàn)研究分成四個(gè)部分。第一部分，檢測NOD小鼠唾液流率，Elisa法檢測血清中細(xì)胞因子IFN-γ和IL-10的表達(dá)，并對NOD小鼠一側(cè)頜下腺作HE

2、染色，RT-PCR法檢測另一側(cè)頜下腺中IFN-γ、IL-10和VIP mRNA的表達(dá)，從而觀察增液湯對NOD小鼠頜下腺的保護(hù)作用以及其能否上調(diào)頜下腺中VIP的表達(dá)。第二部分，給予NOD小鼠腹腔注射VIP，觀察其對小鼠的唾液流率、頜下腺病理、頜下腺中IFN-γ、IL-10、IL-17A和AQP5表達(dá)的影響。第三部分，體外培養(yǎng)SD大鼠的頜下腺細(xì)胞，在培養(yǎng)液中加入VIP及相關(guān)抑制劑，免疫熒光及Western b1ot法檢測VIP對SD大鼠乳鼠

3、頜下腺細(xì)胞AQP5的表達(dá)的影響，并且探討這種調(diào)節(jié)作用是否通過VIP/cAMP/PKA/AQP5信號通路。第四部分，通過同時(shí)給予NOD小鼠增液湯及VIP受體拮抗劑， Elisa法檢測模型小鼠血清中IFN-γ、IL-10和IL-17A等細(xì)胞因子，對NOD小鼠一側(cè)頜下腺作HE染色，RT-PCR法檢測另一側(cè)頜下腺中IFN-γ、IL-10、IL-17A和VIP mRNA的表達(dá)，免疫組化檢測頜下腺中AQP5的表達(dá)，從而探討增液湯治療干燥綜合征中調(diào)節(jié)

4、Th1/Th2、Th17/Treg免疫失衡及AQP5表達(dá)異常是否通過上調(diào)VIP的表達(dá)實(shí)現(xiàn)。
　　結(jié)果：
　　1.理論研究結(jié)果
　　干燥綜合征很難找到引起疾病的直接病因，但是可以通過審證求因，尋找到疾病的第二病因。干燥綜合征的第二病因有燥毒、瘀血等，而這些第二病因可能與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的免疫異常存在關(guān)聯(lián)，并指出祛除第二病因在治療干燥綜合征中有著重要的意義。另外，干燥綜合征病機(jī)核心是津液代謝障礙，津液代謝障礙會影響臟腑結(jié)構(gòu)與功能，

5、而正常臟腑的功能對津液的生成與輸布起著重要的作用，所以通過調(diào)節(jié)臟腑功能從而改善津液代謝是治療干燥綜合征的必要性以及取得療效的可能性。津液代謝障礙可能與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究AQPs表達(dá)異常相關(guān)。增液湯治療干燥綜合征取得療效的理論基礎(chǔ)在于其既能祛除第二病因，又可調(diào)節(jié)臟腑功能從而改善津液生成與輸布。
　　2.實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果
　　2.1.增液湯可以改善NOD小鼠的唾液流率、頜下腺病理、血清及頜下腺中IFN-γ/IL-10免疫失衡，并能上調(diào)頜下

6、腺中VIPmRNA的表達(dá)
　　2.2.VIP可以改善NOD小鼠的唾液流率，頜下腺病理，降低IFN-γ/IL-10和IL-17A/IL-10兩者比值，并能上調(diào)頜下腺中AQP5的表達(dá)。
　　2.3.VIP可以上調(diào)SD大鼠頜下腺中AQP5的表達(dá)，這種上調(diào)過程可被cAMP抑制劑、PKA抑制劑所拮抗，從而說明SD大鼠的頜下腺中可能存在VIP/cAMP/PKA/AQP5的信號通路。
　　2.4.拮抗NOD小鼠VP受體后，增液湯不能

7、改善頜下腺的病理，不能改善血清及IFN-γ/IL-10、IL-17/IL-10免疫失衡，不能被上調(diào)頜下腺的AQP5的表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　在理論方面，燥毒、瘀血等第二病因是干燥綜合征的主要病因，臟腑功能失調(diào)津液代謝障礙是干燥綜合征的病機(jī)核心。增液湯具有解毒潤燥養(yǎng)陰生津的功效，既可以祛除第二病因，又能調(diào)節(jié)臟腑功能增強(qiáng)津液的生成與輸布。理法相合是增液湯取得良好療效的理論依據(jù)。在實(shí)驗(yàn)方面，增液湯能保護(hù)NOD小鼠的頜下腺，改善干燥