2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、【研究背景】肺動(dòng)脈高壓(PAH)是一類以海平面靜息狀態(tài)下,肺動(dòng)脈平均壓(mPAP)≥25mmHg(右心導(dǎo)管下)為血流動(dòng)力學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)的疾病。它是一種可伴隨多種臨床癥狀并能導(dǎo)致嚴(yán)重心肺功能障礙,最終致患者死亡的臨床綜合征,其主要臨床病理生理特點(diǎn)為肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(PASMCs)異常增殖、血管重構(gòu)導(dǎo)致肺動(dòng)脈壓持續(xù)性、漸進(jìn)性增高。近年來(lái)靶向藥物的出現(xiàn)及其廣泛使用給廣大肺動(dòng)脈高壓患者帶來(lái)了福音,然而價(jià)格的高昂及較多副作用大大地限制其治療。因此,尋

2、找肺動(dòng)脈高壓新靶點(diǎn)及新型藥物顯得尤為重要。我們和其他課題組以往的研究發(fā)現(xiàn)丹參酮IIA磺酸鈉(STS)可通過(guò)抑制經(jīng)典瞬時(shí)受體蛋白1,6(TRPC)的表達(dá)從而調(diào)節(jié)PASMCs中的鈣穩(wěn)態(tài),進(jìn)而有效降低慢性低氧性肺動(dòng)脈高壓(CHPH)大鼠模型及野百合堿(MCT)致肺動(dòng)脈高壓大鼠模型的mPAP及其血管重塑。除此之外,研究還發(fā)現(xiàn)了STS可有效治療肺動(dòng)脈高壓患者。然而, STS通過(guò)何種途徑對(duì)PASMCs中基礎(chǔ)鈣(basal[Ca2+]i)及鈣池操縱性

3、鈣內(nèi)流(SOCE)進(jìn)行調(diào)控仍需要進(jìn)一步研究。已有文獻(xiàn)證實(shí)蛋白激酶G(PKG)/過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)通路參與調(diào)節(jié)PASMCs中TRPC1,6蛋白的表達(dá),進(jìn)而影響basal[Ca2+]i和SOCE,并最終導(dǎo)致PASMCs的過(guò)度增殖,肺血管重塑。在此基礎(chǔ)上,提出了研究假設(shè):STS通過(guò)PKG/PPARγ/TRPC信號(hào)通路,從而對(duì)PASMCs中的鈣穩(wěn)態(tài)進(jìn)行調(diào)節(jié)。
  【研究目的】本研究運(yùn)用CHPH大鼠動(dòng)物模型驗(yàn)證STS

4、對(duì)肺動(dòng)脈高壓的治療作用;運(yùn)用大鼠遠(yuǎn)端 PASMCs原代培養(yǎng)模型及 CHPH大鼠動(dòng)物模型觀察 STS干預(yù)對(duì)PASMCs及肺動(dòng)脈平滑肌組織(PA)中PKG、PPARγ蛋白表達(dá)的影響;運(yùn)用PKG抑制劑(RP-8)及PPARγ抑制劑(T0070907),觀察STS對(duì)PASMCs中TRPC1、TRPC6蛋白表達(dá)、[Ca2+]i及SOCE的影響;構(gòu)建PKG及PPARγ特異性小分子干擾RNA(siRNA)沉默PKG及PPARγ表達(dá),觀察 STS對(duì) P

5、ASMCs中 TRPC1、TRPC6蛋白表達(dá)、[Ca2+]i及SOCE的影響;通過(guò) MTT實(shí)驗(yàn),觀察 PKG抑制劑(RP-8)及 PPARγ激動(dòng)劑(GW1929)、抑制劑(T0070907)是否影響STS在缺氧狀態(tài)下對(duì)PASMCs增殖的抑制。從而探討 STS參與 PASMCs中鈣穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)的機(jī)制是否通過(guò)PKG/PPARγ/TRPC信號(hào)通路,為STS防治肺動(dòng)脈高壓疾病提供堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)并尋找更有效靶點(diǎn)。
  【研究方法】
  1

6、.建立慢性低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠模型:(1)運(yùn)用小動(dòng)物生理儀檢測(cè)STS刺激對(duì)右心室收縮壓(RVSP)、平均右心室壓(mRVP)和右心肥厚指數(shù)(RV/(LV+S))的作用;(2)利用蘇木精和伊紅(HE)染色觀察STS刺激對(duì)肺血管重塑的影響;(3)利用Western blotting技術(shù)測(cè)定STS刺激對(duì)PA中PKG、PPARγ蛋白表達(dá)產(chǎn)生的影響。
  2.建立原代肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞模型:(1)利用InCyte細(xì)胞內(nèi)鈣濃度檢測(cè)系統(tǒng),檢測(cè)ST

7、S及RP-8或GW1929或T0070907聯(lián)合刺激對(duì)大鼠PASMCs的基礎(chǔ)[Ca2+]i和SOCE的影響;(2)應(yīng)用Western blotting檢測(cè)STS刺激對(duì)大鼠遠(yuǎn)端PASMCs中PKG、PPARγ蛋白表達(dá)產(chǎn)生的影響,在此基礎(chǔ)上觀察STS及RP-8或GW1929或T0070907聯(lián)合刺激對(duì)大鼠遠(yuǎn)端PASMCs中 TRPC1、TRPC6蛋白表達(dá)的影響;(3)構(gòu)建并轉(zhuǎn)染特異性的siR-PKG及siR-PPARγ到PASMCs,利用I

8、nCyte細(xì)胞內(nèi)鈣濃度檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)STS刺激對(duì)大鼠PASMCs的基礎(chǔ)[Ca2+]i和SOCE的影響并運(yùn)用Western blotting檢測(cè)STS刺激對(duì)大鼠遠(yuǎn)端PASMCs中TRPC1、TRPC6蛋白表達(dá)產(chǎn)生的影響;(4)利用MTT實(shí)驗(yàn),觀察STS及RP-8或GW1929或T0070907聯(lián)合刺激對(duì)大鼠遠(yuǎn)端PASMCs增殖的影響。
  【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】
  1、腹腔注射 STS(30mg/kg.d)治療可降低慢性低氧性肺動(dòng)脈高壓

9、大鼠模型中的RVSP、mRVP和RV/(LV+S),逆轉(zhuǎn)模型組大鼠的血管重塑。
  2、STS(30mg/kg.d)干預(yù)治療可上調(diào)CHPH大鼠肺動(dòng)脈平滑肌組織PKG及PPARγ蛋白表達(dá),且STS(12.5μM,60h)刺激可升高原代培養(yǎng)的大鼠遠(yuǎn)端PASMCs中PKG及PPARγ蛋白表達(dá)。
  3、缺氧狀態(tài)下,PKG抑制劑RP-8(1μM,60h)刺激可逆轉(zhuǎn)STS對(duì)大鼠遠(yuǎn)端PASMCs中PPARγ蛋白的上調(diào)及對(duì)TRPC1、TR

10、PC6蛋白的下調(diào)效應(yīng);而PPARγ拮抗劑T0070907(10μM,60h)刺激可抑制STS對(duì)大鼠遠(yuǎn)端PASMCs中TRPC1、TRPC6蛋白的下調(diào)作用。
  4、缺氧狀態(tài)下,特異性 PKG siRNA可抑制 STS對(duì)大鼠遠(yuǎn)端 PASMCs中PPARγ蛋白的上調(diào)及TRPC1、TRPC6蛋白的下調(diào)作用;而siR-PPARγ則可逆轉(zhuǎn)STS對(duì)的大鼠遠(yuǎn)端PASMCs中TRPC1、TRPC6蛋白表達(dá)的下調(diào)作用。
  5、PKG抑制劑R

11、P-8(1μM,60h)或PPARγ拮抗劑T0070907(10μM,60h)刺激可以抑制缺氧狀態(tài)下STS對(duì)的基礎(chǔ)鈣和SOCE的下調(diào)效應(yīng);相反,PPARγ的激動(dòng)劑GW1929(10μM,60h)則可促進(jìn)STS對(duì)基礎(chǔ)鈣和SOCE的下調(diào)效應(yīng)。
  6、缺氧狀態(tài)下,PKG抑制劑RP-8(1μM,60h)或PPARγ拮抗劑T0070907(10μM,60h)均可抑制STS對(duì)大鼠遠(yuǎn)端PASMCs細(xì)胞增殖的抑制作用,而PPARγ的激動(dòng)劑GW1

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