沉香內(nèi)生真菌的初步研究.pdf

1、內(nèi)生真菌(Endophyticfungi)是一大類(lèi)未被充分研究的真菌。近年來(lái)的研究表明，幾乎所有植物中都存在內(nèi)生真菌，他們主要生長(zhǎng)在植物的根、莖、葉等器官的表皮下的組織當(dāng)中。它泛指那些生活在健康的植物體內(nèi)不引起任何病害癥狀的所有真菌，植物內(nèi)生真菌長(zhǎng)期生活在穩(wěn)定的植物微生態(tài)系統(tǒng)中，和宿主建立了共生或半共生關(guān)系。研究表明已分離出的大多數(shù)植物內(nèi)生真菌能夠產(chǎn)生與其宿主相同或相似的活性成分。 白木香樹(shù)的莖干在刀砍、蟲(chóng)蛀、病腐后被真菌感染，

2、木質(zhì)部的薄壁細(xì)胞中儲(chǔ)存的物質(zhì)產(chǎn)生一系列化學(xué)變化，最后形成樹(shù)脂，即為沉香。為了找出含有樹(shù)脂的木材，必須砍倒樹(shù)干才能找出含有沉香樹(shù)脂的個(gè)體，導(dǎo)致大量白木香樹(shù)遭人砍伐，嚴(yán)重影響了白木香族群的生存。同時(shí)，沉香的高價(jià)也導(dǎo)致了白木香在多個(gè)沉香產(chǎn)地國(guó)被非法砍伐及貿(mào)易。因此，從沉香木塊中分離沉香內(nèi)生真菌研究人工結(jié)香具有重要的意義。 本論文通過(guò)優(yōu)化內(nèi)生真菌的分離條件，從沉香木塊中分離純化出9株沉香內(nèi)生真菌，然后通過(guò)芐基丙酮耐受性、人工結(jié)香材料分析

3、等方法篩選出4株內(nèi)生真菌具有促進(jìn)結(jié)香作用；對(duì)該4株內(nèi)生真菌進(jìn)行分子生物學(xué)種屬鑒定、人工結(jié)香條件實(shí)驗(yàn)和紅褐肉座菌搖瓶發(fā)酵實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果概括如下： 1、沉香內(nèi)生真菌分離條件優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中，采用次氯酸鈉(5％有效氯)作為表面消毒劑處理效果較好，選擇次氯酸鈉(5％有效氯)消毒合適的時(shí)間為4min，最適分離培養(yǎng)溫度是26℃。共分離純化出9株沉香內(nèi)生真菌，經(jīng)初步鑒定分屬2亞門(mén)、5目、5科、5屬。 2、對(duì)沉香揮發(fā)油提取方法進(jìn)行方法學(xué)研究，

4、選擇索氏提取無(wú)水乙醚回流法結(jié)合GC-MS分析沉香揮發(fā)油成分組成。 3、沉香內(nèi)生真菌的篩選實(shí)驗(yàn)中，先后通過(guò)芐基丙酮耐受性篩選、人工結(jié)香樣品變色部分的寬度和燃燒香味篩選，最后篩選出Aq-2、Aq-3、Aq-5b、Aq-7等4株內(nèi)生真菌。 4、沉香內(nèi)生真菌的分子生物學(xué)種屬鑒定，鑒定結(jié)果為：Aq-2為蒂腐色二孢(Botryosphaeriarhodina)，Aq-3為紅褐肉座菌(Hypocreajecorina)，Aq-5b里氏

5、木霉(Trichodermareesei)，Aq-7為康氏木霉(Trichodermakoningii)。 5、對(duì)4株沉香內(nèi)生真菌蒂腐色二孢、紅褐肉座菌、里氏木霉、康氏木霉按照封口方式、打孔位置、接菌方式、結(jié)香時(shí)間等方案進(jìn)行人工結(jié)香條件研究。最適結(jié)香條件：采用棉塞和木塞作為封口方式；選擇樹(shù)干自基部50～100cm之間的區(qū)域作為結(jié)香位置；采用蒂腐色二孢菌株單菌結(jié)香和褐肉座菌、里氏木霉、康氏木霉3株木霉屬內(nèi)生真菌混菌結(jié)香，其次是里氏