靶向示蹤SPIO標記的OECs移植治療大鼠脊髓損傷的研究.pdf

1、目的：1.從SD新生鼠嗅黏膜取材原代培養(yǎng)提純鑒定嗅鞘細胞。2.探討嗅鞘細胞在體外模擬的脊髓損傷缺氧內環(huán)境中是否誘導自噬，并檢測自噬對嗅鞘細胞增殖能力的影響。3.驗證嗅鞘細胞移植對大鼠半橫斷損傷的治療作用。4.探討SPIO體外標記嗅鞘細胞的合適方案，以及體外成像特點。
　　方法：1.用酶消化法和改良的Nash差速貼壁法分離提純嗅鞘細胞，采用CCK-8法繪制生長曲線，選出增殖較好的細胞代次；利用免疫熒光法鑒定細胞屬性和純度。2.采用氧

2、濃度為2％作為低氧條件（低氧處理組），培養(yǎng)SD新生鼠嗅黏膜來源的OECs，以正常條件下培養(yǎng)的OECs作為對照組，采用自噬抑制劑3-MA處理后的OECs繼續(xù)在低氧條件下培養(yǎng)作為3-MA低氧處理組，在相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)；對照組、4h低氧處理組、8h低氧處理組，Western blotting法檢測各組OECs中HIF-1α（Hypoxia inducible factor-1，低氧誘導因子-1α）、自噬標志蛋白LC3Ⅰ/Ⅱ和自噬標志基

3、因Beclin-1的蛋白表達水平；對照組、自噬抑制劑3-MA處理的OECs然后在正常條件下培養(yǎng)作為3-MA處理組、低氧組、3-MA低氧處理組，采用CCK-8法檢測各組OECs的增殖能力。3.建立SD大鼠脊髓左側半橫斷損傷模型，實驗組傷后立即注射嗅鞘細胞，對照組只注射完全培養(yǎng)基，單純損傷組不注射。于1、2、4、6、8周對各組實驗鼠進行大鼠后肢運動功能（BBB）評分。明確嗅鞘細胞移植對脊髓半橫斷損傷大鼠的治療效果。4.用多聚左旋賴氨酸包被過

4、的SPIO納米粒子標記OECs，普魯士藍染色和透射電鏡下觀察標記結果，對標記后的嗅鞘細胞進行細胞活性和增殖能力的檢測并實現(xiàn)體外MRI成像。
　　結果：1.經原代分離、提純培養(yǎng)的SD新生鼠嗅黏膜來源嗅鞘細胞大多數(shù)呈梭形，典型的雙極、三極細胞形態(tài)。激光共聚焦顯微鏡下GFAP和P75雙染陽性的為嗅鞘細胞。根據(jù)計算公式其純度可達87%。2.低氧誘導的自噬對大鼠嗅鞘細胞的增殖能力具有促進作用。3.嗅鞘細胞移植對脊髓半橫斷損傷有治療作用。4.

5、成功應用SPIO標記嗅鞘細胞且不影響其生物學特性，MRI體外成像顯示1×106數(shù)量級細胞在軸位和矢狀位的T2WI和SWI序列上信號可較好顯示。
　　結論：1.成功原代培養(yǎng)、提純嗅鞘細胞。
　　2.低氧誘導的自噬對大鼠嗅鞘細胞的增殖能力具有促進作用。
　　3.嗅鞘細胞移植對脊髓半橫斷損傷有治療作用。
　　4.成功應用SPIO標記嗅鞘細胞且不影響細胞基本生物學特性和增殖能力，并實現(xiàn)MRI體外成像，為以后嗅鞘細胞移植入