祛風(fēng)宣肺湯治療感染后咳嗽動物模型的療效及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、目的:本課題詳述了氣道高反應(yīng)性在感染后咳嗽中的重要性和瞬時感受器電位香草酸受體亞型1(TRPV1)通道蛋白在氣道高反應(yīng)性中的核心作用。并總結(jié)了近幾年來TRPV1拮抗劑的臨床試驗(yàn)研究進(jìn)展，詳述了近年來現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)方法研究的中藥單體在調(diào)節(jié)TRPV1上的研究進(jìn)展，闡述了祛風(fēng)宣肺湯的作用機(jī)理。并在此理論基礎(chǔ)上通過動物模型，進(jìn)一步探索相關(guān)機(jī)制。
　　方法:
　　(1)通過腹腔注射一定濃度LPS造成小鼠感染后咳嗽的氣道高反應(yīng)性模型，并通過比

2、較各組小鼠咳嗽次數(shù)、氣道阻力和肺順應(yīng)性及支氣管肺組織病理證實(shí)LPS模型小鼠造模成功。
　　(2)在造模成功的基礎(chǔ)上，用祛風(fēng)宣肺方干預(yù)腹腔注射LPS的一組小鼠，觀察空白組、LPS組、中藥組小鼠的咳嗽次數(shù)、氣道阻力和肺順應(yīng)性，以及肺組織病理的不同。觀察祛風(fēng)宣肺湯對感染后小鼠感染后咳嗽的治療作用。
　　(3)Elisa方法檢測各組小鼠肺組織中P物質(zhì)表達(dá)含量，熒光定量PCR(real-time PCR)檢測NK1受體mRNA表達(dá)變化

3、，免疫組化監(jiān)測肺組織中辣椒素受體TRPV1蛋白表達(dá)位置及數(shù)量，WB和rt-PCR定量檢查TRPV1的蛋白和基因表達(dá)變化。rt-PCR方法檢測肺組織中NGF和及其受體trKA的mRNA表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　　(1) LPS腹腔注射后模型小鼠的咳嗽咳嗽次數(shù)、氣道阻力和肺順應(yīng)性明顯升高，肺組織病理示小鼠肺支氣管周圍炎性浸潤。
　　(2)祛風(fēng)宣肺方能明顯降低模型小鼠咳嗽咳嗽次數(shù)、氣道阻力和增加模型小鼠肺順應(yīng)性，組織病理示祛

4、風(fēng)宣肺方具有降低LPS引起的肺支氣管炎癥的作用。
　　(3) LPS組小鼠中的SP、NK1表達(dá)較空白組明顯升高，祛風(fēng)宣肺方灌胃的中藥組小鼠肺組織中的SP、NK1含量低于LPS組;免疫組化顯示TRPV1主要表達(dá)在支氣管璧周圍，免疫組化的半定量分析示LPS可引起TRPV1的顯著增高，中藥組則明顯降低，WB和rt-PCR顯示祛風(fēng)宣肺湯組TPRV1蛋白和mRNA表達(dá)低于LPS組。rt-PCR顯示LPS組小鼠肺組織的NGF和trKa較空白組