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文檔簡介
1、目的:胃癌是人類消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一,在世界范圍內(nèi)其發(fā)病呈上升趨勢。GLOBALCAN最新數(shù)據(jù)顯示,2012年全球新發(fā)胃癌病例95.1萬,發(fā)病率占全球惡性腫瘤第五位,死亡率為第三位,其中男女發(fā)病率之比為2-3∶1。胃癌的發(fā)病機制尚未完全明確,目前公認是由多基因多因素參與、環(huán)境和遺傳因素共同作用導(dǎo)致,而癌轉(zhuǎn)移是造成其預(yù)后差的重要原因。
Kiss-1基因最早在黑色素瘤細胞株中被發(fā)現(xiàn),定位于染色體1q32-q41,編碼1個親水
2、性蛋白、包含4個外顯因子,其中親水蛋白由145個氨基酸組成。研究證實,Kiss-1基因是多種惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移抑制基因,腫瘤的轉(zhuǎn)移及預(yù)后與Kiss-1基因的表達下調(diào)關(guān)系密切。Notch基因的發(fā)現(xiàn)最早是在果蠅體內(nèi),其被首次克隆成功在1980年。目前,在哺乳動物中共發(fā)現(xiàn)4種Notch受體(Notch1、Notch2、Notch3和Notch4)。研究表明,Notch1與多種腫瘤有密切關(guān)系,在腫瘤的進展及轉(zhuǎn)移中起重要的作用。目前,尚未闡明兩個基因
3、在胃癌發(fā)病過程中的作用。
本文應(yīng)用RT-qPCR(real-time quantitative reverse transcription-PCR,RT-qPCR)方法檢測胃癌組織及癌旁正常組織中Kiss-1 mRNA和Notch1mRNA表達情況,并經(jīng)過分析其與臨床病理特征(分化程度、轉(zhuǎn)移、分期、預(yù)后等)之間的關(guān)系,探討其在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中所起到的作用,為胃癌診治提供新的思路。
方法:
1、2013年1
4、0月~2014年10月期間,河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院經(jīng)病理證實胃癌住院手術(shù)患者34例,其中男性22例,女性12例,年齡49-83歲(平均年齡66.06±9.18歲),采集標本前所有的患者均沒有進行放療、化療,以及免疫治療。收集患者性別、年齡、TNM分期、腫瘤位置、組織學(xué)類型、淋巴結(jié)狀態(tài)、浸潤深度、分化程度、遠處轉(zhuǎn)移等臨床病理資料,登記建表并簽署知情同意書。分組情況:胃癌組34例標本均取自手術(shù)切除的胃癌組織;正常對照組34例標本均取自距腫瘤邊
5、緣5cm及以上的正常胃黏膜組織。34例標本均在病理組織學(xué)診斷證實后最終選取。
2、TrizoL法提取34例胃癌組織及34例癌旁正常組織中的總RNA。
根據(jù)美國GeneCopoeia公司提供的反轉(zhuǎn)錄試劑盒操作說明書進行反轉(zhuǎn)錄。RT-qPCR檢測癌組織及癌周邊正常組織中的Kiss-1 mRNA、Notch1 mRNA的表達,引物購自美國GeneCopoeia公司,按說明書操作。反應(yīng)條件:95℃預(yù)變性10 min,然后按9
6、5℃15s,60℃30s,72℃10s,進行40個循環(huán),重復(fù)3次取平均值。本研究靶基因的表達量采用2-△CT表示,其中△CT為CT靶基因與CTGAPDH的差值。
3、統(tǒng)計學(xué)處理
采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析,數(shù)據(jù)以中位數(shù)(四分位數(shù)間距)表示,兩組間配對樣本采用Wilcoxon秩和檢驗,兩組間獨立樣本采用Mann-Whitney U檢驗,均以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
結(jié)果:
1、
7、Kiss-1 mRNA在胃癌組中的表達較正常對照組顯著降低,組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
2、Kiss-1 mRNA在胃癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組、TNM分期Ⅲ-Ⅳ期組中的表達顯著低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及TNM分期Ⅰ-Ⅱ期組,組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
3、Notch1 mRNA在胃癌組中的表達較正常組顯著升高,組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
4、Notch1 mRNA在胃癌有淋
8、巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及TNM分期Ⅲ-Ⅳ期組中的表達顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及Ⅰ-Ⅱ期組,組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
5、Notch1 mRNA在胃癌低分化組的表達顯著高于高分化組,組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
6、Kiss-1 mRNA與Notch1 mRNA的表達均與患者性別、年齡、病理類型等無明顯相關(guān)性,組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
結(jié)論:
1、Kiss-1 m
9、RNA在胃癌組織中的表達較癌旁正常組織顯著下調(diào),提示其在胃癌發(fā)病過程中可能發(fā)揮抑癌作用。
2、Kiss-1 mRNA的表達與胃癌分期及轉(zhuǎn)移密切相關(guān),提示其可能通過抑制胃癌的轉(zhuǎn)移來影響預(yù)后。
3、Notch1 mRNA在胃癌組織中的表達較癌旁正常組織顯著上調(diào),提示其在胃癌發(fā)病過程中可能發(fā)揮促癌作用。
4、Notch1 mRNA的表達與胃癌的分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及其分化程度密切相關(guān),進一步提示Notch1 mRNA
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