右歸丸延緩陽(yáng)虛小鼠衰老進(jìn)程的多靶點(diǎn)研究.pdf

1、目的：初步論證右歸丸改善陽(yáng)虛小鼠體質(zhì)，延緩衰老的效應(yīng)。從能量代謝細(xì)胞器線粒體的修復(fù)以及多個(gè)免疫、衰老相關(guān)基因、蛋白表達(dá)水平的差異研究，部分揭示右歸丸改善陽(yáng)虛體質(zhì)，延緩衰老的生物學(xué)機(jī)制，為中醫(yī)體質(zhì)辨證與養(yǎng)生防衰提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：1.參照肖小河動(dòng)物溫度趨向性行為學(xué)智能檢測(cè)系統(tǒng)原理，設(shè)計(jì)簡(jiǎn)易動(dòng)物寒熱趨向模型篩選陽(yáng)虛體質(zhì)老齡小鼠，隨機(jī)分為陽(yáng)虛治療組、陽(yáng)虛空白組和非陽(yáng)虛對(duì)照組，陽(yáng)虛治療組經(jīng)右歸丸干預(yù)后，以非陽(yáng)虛質(zhì)小鼠作為對(duì)照組，對(duì)其

2、效應(yīng)進(jìn)行客觀評(píng)價(jià)；
　　2.采用透射電鏡觀察3個(gè)組心腦組織線粒體的超微結(jié)構(gòu)變化；
　　3.基于課題組前期研究結(jié)果，采用RT-PCR法研究治療后，陽(yáng)虛治療組、陽(yáng)虛空白組和非陽(yáng)虛對(duì)照組間全血樣本中衰老相關(guān)基因（FHIT、HBD、MAP2K6、WNT5B、CSNK1D、FRAT2、DAPK2、GSK3A）和海馬組織中BDNF與TrKB的表達(dá)水平差異；采用原位雜交法研究下丘腦中衰老相關(guān)基因（CaM）在3個(gè)組間的表達(dá)水平差異；

3、　　4.采用免疫組化法研究3個(gè)組間心、脾、腎和腦組織中免疫與衰老相關(guān)蛋白：FHIT、HBD、MAP2K6、WNT5B、CSNK1D、FRAT2、DAPK2和GSK3A的表達(dá)水平差異；血液中SOD酶及MDA在3個(gè)組間表達(dá)水平的差異；
　　結(jié)果：1.陽(yáng)虛治療組用藥后，飼料消耗率和肛溫顯著升高，體重和趨40度溫控板頻率降低；與陽(yáng)虛空白組相比，飼料消耗率、肛溫、體重和趨40度溫控板頻率有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，生存時(shí)間有增長(zhǎng)的趨勢(shì)；腎、心、肺、脾、睪

4、丸、腎上腺的臟器指數(shù)有降低趨勢(shì)，肝、胸腺有升高的趨勢(shì)。
　　2.3個(gè)組老齡小鼠心腦組織線粒體腫脹程度和線粒體嵴斷裂程度按非陽(yáng)虛對(duì)照組、陽(yáng)虛治療組和陽(yáng)虛空白組的順序逐次加重。
　　3.與陽(yáng)虛空白組相比，陽(yáng)虛治療組CSNK1D,DAPK2和WNT5B基因表達(dá)量顯著降低（P<0.05），BDNF、TrKB、HBD1和CaM基因表達(dá)量顯著升高（P<0.05）；與非陽(yáng)虛對(duì)照組相比，陽(yáng)虛治療組DAPK2和WNT5B基因表達(dá)量極顯著降低（

5、P<0.01），MAP2K6和CaM基因表達(dá)量顯著升高（P<0.05）；
　　4.與陽(yáng)虛空白組相比，陽(yáng)虛治療組心臟組織中WNT5B和FRAT2的蛋白表達(dá)量呈極顯著降低(P<0.01)；脾臟組織中HBD1的蛋白表達(dá)量極顯著升高（P<0.01），GSK3A、WNT5B和FRAT2的蛋白表達(dá)量極顯著降低（P<0.01），DAPK2的蛋白表達(dá)量顯著降低(P<0.05)；腎臟組織中WNT5B、CSNK1D和GSK3A的蛋白表達(dá)量均極顯著降低

6、(P<0.05)，MAP2K6蛋白表達(dá)量顯著升高；腦組織中WNT5B的蛋白表達(dá)量極顯著降低(P<0.01)，CSNK1D、FRAT2和GSK3A的蛋白表達(dá)量呈顯著降低(P<0.05)，MAP2K6蛋白表達(dá)量顯著升高。
　　與非陽(yáng)虛對(duì)照組相比，陽(yáng)虛治療組脾臟組織中MAP2K6的蛋白表達(dá)量顯著降低(P<0.05)，DAPK2的蛋白表達(dá)量顯著升高(P<0.05)；腎臟組織中CSNK1D和DAPK2的蛋白表達(dá)量均顯著性升高(P<0.05)

7、，MAP2K6顯著性降低(P<0.05)；腦組織中CSNK1D和FRAT2的蛋白表達(dá)量顯著升高(P<0.05)，F(xiàn)HIT顯著降低(P<0.05)，HBD1極顯著降低(P<0.01)。
　　結(jié)論：1.初步論證了“改善陽(yáng)虛體質(zhì)可能延緩衰老進(jìn)程”的科學(xué)假說(shuō)；
　　2.線粒體超微結(jié)構(gòu)的修復(fù)或?yàn)橛覛w丸改善陽(yáng)虛延緩衰老的重要機(jī)制之一；
　　3.抑制細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤發(fā)生、平衡生物鐘、增強(qiáng)免疫應(yīng)答和抑制過(guò)氧化損傷可能是右歸丸改善陽(yáng)虛