miRNA122和miRNA199基因單核苷酸多態(tài)性與肝細胞肝癌易感性及預后的關系.pdf

1、近年研究表明，miRNA相關SNPs可通過影響miRNA的成熟過程、表達水平及與靶基因的識別及結合等，使miRNA調(diào)控網(wǎng)絡發(fā)生異常，從而影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預后。miRNA相關SNPs主要包括miRNA自身基因SNPs、生物合成通路相關基因SNPs及miRNA靶基因中的SNPs。而由于成熟miRNA的分子長度較短，所以位于自身基因中的SNPs極可能影響該miRNA分子的成熟過程及下游功能，一系列基因組關聯(lián)研究及體外實驗的證實了這一假設

2、。鑒于miRNA-122和miRNA-199在肝細胞肝癌過程中的作用，因此，推測位于miRNA-122和miRNA-199自身基因SNPs可能通過影響相應miRNA的調(diào)控網(wǎng)絡，從而影響肝細胞肝癌發(fā)病風險、臨床特征及預后。本研究將分兩部分，第一部分采用病例對照研究方法探討miRNA-122和miRNA-199基因SNPs與肝細胞肝癌遺傳易感性的關系，第二部分收集肝細胞肝癌病例相關臨床資料，并對肝癌根治術病例進行隨訪研究，探討miRNA-1

3、22和miRNA-199基因SNPs與肝細胞肝癌臨床特征及肝癌根治術后預后的關系。
　　第一部分 miRNA-122和miRNA-199基因單核苷酸多態(tài)性與肝細胞肝癌遺傳易感性的關聯(lián)研究
　　目的：
　　探討miRNA-122 rs9966765、rs1135519、rs17669及miRNA-199rs74723057和rs12120556，5個位點SNPs與廣西地區(qū)人群肝細胞肝癌遺傳易感性的關系。并分析上述多態(tài)位點

4、基因與基因、基因與環(huán)境因素的交互作用在肝細胞肝癌易感性中的作用。
　　方法：
　　(1)本研究采用以醫(yī)院為基礎的較大樣本病例-對照研究設計方法。所有研究對象均為從2007年6月到2011年6月，來自廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院、附屬腫瘤醫(yī)院和廣西中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院同意參與調(diào)查、經(jīng)組織學病理確診，未接受化療和放射治療的原發(fā)性肝細胞肝癌新發(fā)病例，共收集1050例;對照組選自同期住院的脊柱骨科、創(chuàng)傷外科、美容整形外科及眼科的非腫瘤患

5、者，按年齡、性別匹配，共收集對照組1079例。采用調(diào)查問卷收集研究對象的基本情況、既往史、個人史、家族史、飲酒史和吸煙史等。采集研究對象外周血2 ml，采用Sequenom MassArray基因分型系統(tǒng)對候選的5個多態(tài)位點進行因分型檢測。
　　(2)miRNA-122、miRNA-199基因SNPs的選擇利用dbSNP數(shù)據(jù)庫，按照預先設定的頻率標準篩選上述SNPs。本研究設定的頻率標準是:候選SNPs最小等位基因頻率(MAF)為

6、0.05且各SNPs之間LD(r2)小于0.8。
　　(3)采用卡方檢驗比較病例組和對照組一般人口學資料。采用非條件Logistic回歸比較各基因型在肝細胞肝癌患者和對照組之間分布頻率的差異。采用多因素Logistic回歸分析基因-基因及基因-環(huán)境的交互作用。
　　結果：
　　(1)miRNA-122基因rs1135519位點野生純合子TT在病例和對照組中的分布頻率分別為68.65％、73.14％，突變雜合子TC在兩組

7、中的分布頻率分別為28.37％、25.09％，突變純合子CC在兩組的分布頻率分別為2.98％、1.77％，經(jīng)卡方檢驗TT、TC、CC三種基因型在病例和對照組中的分布具有統(tǒng)計學差異(P=0.022)。調(diào)整年齡、性別、吸煙、飲酒以及HBV感染等影響因素，攜帶突變基因型CC可顯著增加肝細胞肝癌患病風險(OR=2.708，95％CI:1.154-6.356)。但是未發(fā)現(xiàn)miRNA-122基因rs9966765、rs17669和miRNA-199

8、基因rs74723057、rs12120556多態(tài)性位點與肝細胞肝癌患病風險相關。
　　(2)分層分析結果顯示，miRNA-122基因rs9966765 GC/CC、rs1135519 TC/CC位點基因型可增加較大年紀（＞47歲，平均年齡）個體罹患肝細胞肝癌的風險(調(diào)整OR=1.565，95％CI:1.063-2.303; OR=1.534，95％CI:1.043-2.257);miRNA-122基因rs17669位點AG/GG

9、基因型可增加較大年紀（＞47歲，平均年齡）個體罹患肝細胞肝癌的風險(OR=1.482，95％CI:1.003-2.192)，并且可增加女性肝細胞肝癌的患病風險(OR=2.240，95％CI:1.035-4.484)。
　　(3)基因-環(huán)境因素交互作用分析結果顯示，miRNA-122 rs17669位點AG基因型與飲酒在肝細胞肝癌發(fā)病中存在交互作用(P=0.045);合并AG/GG基因型發(fā)現(xiàn)，G等位基因與飲酒在肝細胞肝癌發(fā)病過程中存

10、在顯著交互作用(P=0.044)，但是未發(fā)現(xiàn)miRNA-122rs9966765、rs1135519和miRNA-199基因rs74723057、rs12120556位點多態(tài)性與飲酒存在交互作用。
　　結論：
　　本研究結果表明，miRNA-122基因SNPs可能影響肝細胞肝癌遺傳易感性，rs1135519位點多態(tài)性可能是廣西地區(qū)人群肝細胞肝癌獨立危險因素，rs17669位點多態(tài)性與飲酒交互作用影響肝細胞肝癌發(fā)病風險。

11、>　　第二部分 miRNA-122和miRNA-199基因單核苷酸多態(tài)性與肝細胞肝癌臨床特征及肝癌根治術后預后的關系
　　目的：
　　探討廣西地區(qū)人群miRNA-122基因rs9966765、rs1135519、rs17669和miRNA-199基因rs74723057、rs12120556五個多態(tài)性位點SNPs與肝細胞肝癌臨床特征及肝癌根治術后整體生存及無復發(fā)生存時間的關系，為肝細胞肝癌的預后評價提供理論依據(jù)。
　　

12、方法：
　　收集2007年2月至2009年2月在廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院和廣西醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院就診和治療的肝細胞肝癌新發(fā)病例276例，包括接受根治性切除術或非手術治療的肝細胞肝癌患者。通過查閱住院病歷詳細記錄患者的一般情況、確診時間、治療方式、影像學檢查結果等臨床特征數(shù)據(jù)及AFP水平、總膽紅素及白蛋白等實驗室檢查結果。并對納入本研究的接受肝癌根治術后的肝細胞肝癌確診病例進行電話隨訪，收集并詳細記錄患者存活、復發(fā)、轉(zhuǎn)移及死亡情況

13、等情況，共收集到資料完整病例179例。采用Sequenom MassArray技術對上述候選位點進行基因分型檢測，應用EpiData3.0對所有資料進行雙錄入和一致性檢查，并運用SPSS13.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。以卡方檢驗或確切概率法比較各基因型分布頻率與肝細胞肝癌臨床特征的關系，用乘積極限法(Kaplan-Meier-method)繪制生存曲線，對數(shù)秩檢驗(Log-rank test)比較上述位點不同基因型攜帶者無復發(fā)生存時間、總

14、生存時間的差異，多因素Cox比例風險回歸模型分析位于miRNA-122和miRNA-199基因上五個SNPs與肝細胞肝癌臨床特征及肝癌根治術后整體生存及無復發(fā)生存的關系。所有統(tǒng)計檢驗均為雙側概率檢驗，檢驗水準α=0.05。
　　結果：
　　(1) miRNA-122和miRNA-199基因5個SNPs各位點基因型與肝細胞肝癌患者臨床特征，包括大體分型、腫瘤直徑大小、腫瘤位置、腫瘤個數(shù)、術前肝硬化、門脈癌栓、脈管侵犯情況、被膜

15、侵犯以及血清中AFP、總膽紅素、白蛋白水平等均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　(2)K-M單因素分析結果顯示，miRNA-122和miRNA-199基因5個SNPs各位點基因型與肝細胞肝癌患者總生存時間和無復發(fā)生存時間均無統(tǒng)計學關聯(lián)(P＞0.05)。
　　(3)校正年齡性別吸煙飲酒和HBV感染因素的Cox回歸分析結果顯示，miRNA-122基因rs1135519位點CC基因型與肝細胞癌根治術后總體生存時間無統(tǒng)計學關聯(lián)，但

16、是可延長肝癌根治術后無復發(fā)生存時間(校正HR=0.192,95％CI0.043-0.858)。
　　結論：
　　miRNA-122基因rs9966765、rs1135519、rs17669和miRNA-199基因rs74723057、rs12120556五個多態(tài)性位點基因多態(tài)性與肝細胞肝癌臨床特征無統(tǒng)計學關聯(lián)，miRNA-122基因rs1135519位點基因多態(tài)性可影響肝癌根治術后總體生存時間，而miRNA-199基因rs7