腦通湯對輕度血管性癡呆治療作用及機(jī)制探討.pdf

1、目的:
　　1)探討腦通湯免煎顆粒治療輕度血管性癡呆（氣虛血瘀證）的臨床療效。
　　2)通過觀察腦通湯對缺氧/缺糖損傷后海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞Nf-kB信號通路介導(dǎo)的炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6基因表達(dá)和Nf-kB分泌的干預(yù)作用，探討海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞的抗炎機(jī)制。
　　3)通過觀察腦通湯對缺氧/缺糖損傷后海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞Nrf2/ARE信號通路介導(dǎo)的抗氧化酶HO-1、NQO1基因表達(dá)和Nrf2分泌的干預(yù)作用，探討海

2、馬星形膠質(zhì)細(xì)胞的抗氧化機(jī)制。
　　4)通過觀察腦通湯對缺氧/缺糖損傷后海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞BDNF及其受體TrkB基因表達(dá)和BDNF分泌的干預(yù)作用，探討海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞對NVU的保護(hù)機(jī)制。
　　方法:
　　1)按標(biāo)準(zhǔn)將符合輕度血管性癡呆的56例患者隨機(jī)分為治療組（28例）和對照組（28例），治療紐采用腦通湯免煎顆粒治療;對照組采用安理申治療，兩組治療均為期6個月。觀察分析治療前后的MMSE、ADL積分及中醫(yī)癥狀積分變化，運(yùn)

3、用尼莫地平療效判定標(biāo)準(zhǔn)評定臨床療效，并觀測實(shí)驗(yàn)藥物的安全性。
　　2)通過海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)、鑒定以及制備腦通湯含藥血清，為下一部實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行做準(zhǔn)備。采用缺氧/缺糖方式進(jìn)行造模，然后MTT比色法測定海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞缺氧缺糖24h復(fù)氧復(fù)糖2h時間點(diǎn)的活性劑存活率;將海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞隨機(jī)分為6組，分別為:正常細(xì)胞組、模型組、正常血清組、大、中、小劑量腦通湯含藥血清組。除正常細(xì)胞組外，其余各組均進(jìn)行缺氧/缺糖處理，其中含藥血清組提前

4、添加含藥血清進(jìn)行干預(yù)。缺氧/缺糖處理厲通過實(shí)時熒光定量PCR法檢測海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞Nrf2、HO-1、NQO1 mRNA;Nf-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA;BDNF、TrkBmRNA的基因表達(dá);通過ELISA檢測海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞Nrf2、Nf-κB、BDNF的分泌。
　　結(jié)果:
　　1)治療組與對照組藥物均能明顯改善VD患者的認(rèn)知功能、日常生活能力及中醫(yī)癥候，而且治療組療效與對照組相比無明顯差異。結(jié)果表

5、明腦通湯免煎顆粒在改善患者認(rèn)知功能、日常生活能力和中醫(yī)臨床療效方面療效顯著，而且腦通湯免煎顆粒在改善患者上述各方面能力與西藥安理申無明顯差異。用藥過程中，治療紐無明顯不良反應(yīng)，安全性良好。
　　2)經(jīng)過海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)、鑒定及制備腦通湯含藥血清，本實(shí)驗(yàn)成功獲得了海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞以及腦通湯含藥血清，為下一步實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。經(jīng)過MTT比色法發(fā)現(xiàn)24h和2h為本實(shí)驗(yàn)的最佳缺氧缺糖和復(fù)氧復(fù)糖時間點(diǎn)。海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞實(shí)時熒光定量PC

6、R顯示:與正常細(xì)胞組比較，模型紐Nrf2、HO-1、NQO1、Nf-κ B、TNF-α、IL-1β、IL-6的相對表達(dá)量表達(dá)明顯升高(P＜0.05)，而模型組BDNF、TrkBmRNA的相對表達(dá)量表達(dá)明顯降低。與模型組比較，不同劑量腦通湯含藥血清組Nrf2、HO-1、NQO1、BDNF、TrkB mRNA的相對表達(dá)量表達(dá)明顯升高(P＜0.05)，而Nf-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA的相對表達(dá)量表達(dá)明顯降低(P＜0.0

7、5)。但正常血清組與模型組比較上述各種基因表達(dá)均無顯著差異(p＞0.05)。ELISA檢測Nrf2、Nf-κ B、BDNF蛋白的變化情況與其相應(yīng)mRNA具有一致性。
　　結(jié)論：
　　1)腦通湯免煎顆粒能明顯改善輕度血管性癡呆氣虛血瘀證患者臨床癥狀，提高臨床療效，為臨床治療輕度血管性癡呆氣虛血瘀證患者提供了有效制劑。
　　2)缺氧/缺糖模型能很好的模擬海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞腦缺血再灌注損傷。腦通湯對缺氧/缺糖損傷的海馬星形膠質(zhì)

8、細(xì)胞的抗炎、抗氧化具有調(diào)節(jié)作用，且能增強(qiáng)星形膠質(zhì)細(xì)胞對整個NUV的保護(hù)作用。其作用機(jī)制，與本方能抑制缺氧/缺糖損傷時由Nf-kB信號通路介導(dǎo)的炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6的基因表達(dá)以及Nf-kB分泌，減輕其介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)有關(guān);與本方能上調(diào)缺氧/缺糖損傷由Nrf2/ARE信號通路介導(dǎo)的抗氧化酶HO-1、NQO1的基因表達(dá)以及Nrf2分泌，對抗氧化應(yīng)激對星形膠質(zhì)細(xì)胞的損傷有關(guān);與本方能上調(diào)缺氧/缺糖損傷BDNF及其受體TrkB的