LSINCT5在上皮性卵巢癌中的表達(dá)及抑制其表達(dá)的體外研究.pdf

1、背景：
　　卵巢癌(ovarian cancer)是女性常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，致死率在所有惡性腫瘤中居于首位。卵巢位于盆腔的深部，卵巢癌早期病變很難被發(fā)現(xiàn)，而且缺乏有效的治療手段。隨著診療技術(shù)不斷提高和新化療藥物的臨床應(yīng)用，卵巢癌患者的預(yù)后已經(jīng)得到了極大改善。但是由于多數(shù)卵巢癌患者在行根治性手術(shù)前已經(jīng)出現(xiàn)了微轉(zhuǎn)移，總體生存率并沒(méi)有得到顯著的提高。
　　近幾年，在分子生物學(xué)技術(shù)不斷發(fā)展的基礎(chǔ)上，腫瘤學(xué)主要集中在基因靶向分子治療方

2、面的研究。采用化學(xué)合成、慢病毒載體或是質(zhì)粒載體等方法將相關(guān)靶基因的干擾片段轉(zhuǎn)入到需要研究的細(xì)胞中，干擾靶基因的表達(dá)，通過(guò)檢測(cè)干擾后靶基因表達(dá)水平的變化和細(xì)胞生物學(xué)行為的改變，初步研究靶基因在相應(yīng)細(xì)胞增殖和分化中的作用。
　　長(zhǎng)鏈非編碼RNA（Long non-coding RNA，LncRNA）是一類(lèi)不能為蛋白質(zhì)編碼的RNA。已有越來(lái)越多的研究顯示LncRNA能夠在染色質(zhì)修飾、轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄后等水平調(diào)控下游基因的表達(dá)，進(jìn)而參與細(xì)胞增殖

3、、凋亡及侵襲等多種生物學(xué)過(guò)程并與腫瘤等疾病的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。但是LncRNA與卵巢癌發(fā)生發(fā)展的研究尚還處于起步階段。本研究基于國(guó)外關(guān)于長(zhǎng)鏈非編碼基因芯片研究結(jié)果，選取在卵巢癌呈差異表達(dá)的應(yīng)激誘導(dǎo)長(zhǎng)非編碼轉(zhuǎn)錄本5(Long stress-induced non-coding transcript5，LSINCT5)做為研究對(duì)象，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)LSINCT5在上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer，E

4、OC）和正常卵巢組織的表達(dá)情況，并分析其與卵巢癌臨床病理指征的關(guān)系。通過(guò)小片段RNA(siRNA)干擾技術(shù)，靶向沉默卵巢癌SKOV3細(xì)胞株中LSINCT5基因的表達(dá)，初步探討LSINCT5對(duì)卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。
　　目的：
　　第一部分研究長(zhǎng)鏈非編碼基因LSINCT5在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)水平，并分析其表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性；第二部分主要是將化學(xué)合成siRNA干擾片段瞬時(shí)轉(zhuǎn)染卵巢癌SKOV3細(xì)胞，初步探討長(zhǎng)鏈

5、非編碼基因LSINCT5對(duì)卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。
　　方法：
　　1、采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)長(zhǎng)鏈非編碼基因LSINCT5在上皮性卵巢癌組織和正常卵巢組織標(biāo)本中的表達(dá)情況，并分析其表達(dá)水平與卵巢癌患者的臨床分期、病理分級(jí)等臨床病理特征的關(guān)系。
　　2、設(shè)計(jì)針對(duì)目的基因LSINCT5的LSINCT5-SiRNA片段，通過(guò)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的方法，將其轉(zhuǎn)入到卵巢癌SKOV3細(xì)胞中，沉默靶基因的表達(dá)。
　　3、采用C

6、CK8試劑盒、Transwell小室等檢測(cè)轉(zhuǎn)染LSINCT5-SiRNA后卵巢癌SKOV3細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移等生物學(xué)行為的改變。
　　結(jié)果：
　　1、上皮性卵巢癌組織中LSINCT5 mRNA的表達(dá)量明顯高于正常卵巢組織中LSINCT5 mRNA的表達(dá)量[(25.75±47.31) vs.(3.78±6.65)]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　2、上皮性卵巢癌組織中Ⅲ、Ⅳ期LSINCT5 mRNA的表達(dá)量

7、明顯高于Ⅰ、Ⅱ期LSINCT5 mRNA的表達(dá)量[(36.96±56.86) vs.(6.39±4.57)]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3、上皮性卵巢癌組織中中低分化、低分化及未分化組LSINCT5 mRNA的表達(dá)量明顯高于高分化組[(29.73±51.01) vs.(5.89±4.70)],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　4、上皮性卵巢癌組織中發(fā)生大網(wǎng)膜或淋巴組織轉(zhuǎn)移組LSINCT5 mRNA的表達(dá)量

8、明顯高于未發(fā)生組[（46.35±60.90）vs.（5.16±4.44）]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　5、轉(zhuǎn)染卵巢癌SKOV3細(xì)胞48小時(shí)以后，干擾組中LSINCT5 mRNA的表達(dá)水平較陰性對(duì)照組明顯下調(diào)（P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　6、轉(zhuǎn)染卵巢癌SKOV3細(xì)胞48小時(shí)以后，細(xì)胞的遷移和侵襲的能力出現(xiàn)明顯降低（P<0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　7、轉(zhuǎn)染卵巢癌SKOV3細(xì)胞48小時(shí)以后

9、，24、48小時(shí)細(xì)胞的增殖能力較陰性對(duì)照組下降（P<0.05），72小時(shí)細(xì)胞增殖能力下降不明顯（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、LSINCT5在上皮性卵巢癌組織中陽(yáng)性表達(dá)，且表達(dá)水平與患者的臨床分期、病理分級(jí)以及有無(wú)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示LSINCT5在上皮性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起到了重要的作用。
　　2、瞬時(shí)轉(zhuǎn)染LSINCT5-siRNA靶向沉默LSINCT5的表達(dá)后，卵巢癌SKOV3細(xì)胞的侵襲和遷移能力下降；2