Interceed聯(lián)合雌激素治療兔宮腔粘連的療效及對子宮內(nèi)膜容受性的影響.pdf

1、本文分兩個部分進行探討：
　　第一章 Interceed聯(lián)合雌激素治療兔官腔粘連的療效
　　目的:．
　　采用機械及感染雙重損傷法構(gòu)建新西蘭大白兔IUA動物模型，給予宮腔內(nèi)置入Interceed和肌注雌激素聯(lián)合治療，探討其療效，為臨床治療提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.健康成年雌性未孕普通級新西蘭大白兔96只，隨機分為6組，每組各16只。
　　(1)正常對照組:行假手術(shù)，不造模。
　　(2)

2、Interceed對照組:在正常兔子宮宮腔內(nèi)置入Interceed。
　　(3)模型組:建模后不做任何治療。
　　(4)Interceed治療組:建模后1w宮腔內(nèi)置入Interceed治療。
　　(5)雌激素治療組:建模后1w大腿肌注苯甲酸雌二醇(0.5mg/kg)，每4天注射1次，共2次。
　　(6)聯(lián)合治療組:建模后1w宮腔內(nèi)置入Interceed同時肌注苯甲酸雌二醇(0.5mg/kg)，每4天注射1次，共2

3、次。
　　其中后4組均采用雙重損傷法（刮宮及脂多糖棉線置入）造模。此造模方法是本研究團隊前期研究工作中成功自創(chuàng)及應(yīng)用的方法，重復(fù)性良好，具體造模過程見正文。
　　2.每組分別在治療前(即建模后1w)、治療后1w、2w、4w各取4只，采集耳緣靜脈血，放射免疫法檢測血清中雌二醇的濃度;處死后收集雙側(cè)子宮組織，肉眼觀察子宮的解剖學(xué)變化;HE染色觀察子宮內(nèi)膜形態(tài)及進行腺體計數(shù);Masson染色檢測子宮內(nèi)膜纖維化程度;IHC法檢測子宮

4、內(nèi)膜TGF-β1的蛋白表達。
　　3.采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，所有實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差表示，進行方差齊性檢驗，多組間比較采用單因素方差分析(One-Way ANOVA)，各組間兩兩比較:若符合方差齊性，則采用LSD檢驗;若不符合方差齊性，則采用Tamhane's檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.各組子宮解剖學(xué)觀察
　　正常對照組子宮外觀呈粉紅色，子宮內(nèi)膜區(qū)呈灰白色，

5、可見腺體開口，表面無出血或充血點。Interceed對照組解剖學(xué)結(jié)構(gòu)無明顯改變，可觀察到Interceed置入宮腔2w完全吸收。模型組在隨建模時間的延長子宮水腫和宮腔積水程度逐漸加重，腺體極少，子宮內(nèi)膜厚薄不均。Interceed治療組、雌激素治療組及聯(lián)合治療組隨著治療時間的延長，子宮水腫和官腔積水情況逐漸減輕，腺體不同程度修復(fù)，其中聯(lián)合治療組治療后4w子宮解剖學(xué)形態(tài)基本恢復(fù)正常。實驗各組卵巢、輸卵管等其他器官外觀均無明顯變化。

6、　　2.各組兔血清雌二醇濃度比較
　　各組血清雌二醇濃度的方差分析顯示:不同處理組間有顯著性差異(F=6.585，P=0.000);處理后不同時間之間亦有顯著性差異(F=9.501，P=0.000)。
　　3.HE染色下子宮內(nèi)膜腺體數(shù)量的比較
　　HE染色下正常兔子宮分內(nèi)膜層、肌層及漿膜層，其中內(nèi)膜層可分為黏膜層及黏膜下層，黏膜層為單層柱狀上皮細胞覆蓋，黏膜下可見腺體、血管和少量成纖維細胞。隨著治療時間的延長，三個治療

7、組子宮內(nèi)膜腺體數(shù)量均呈不同程度增加。
　　4.Masson染色下子宮內(nèi)膜纖維化面積比的比較
　　Masson染色下可觀察到正常兔子宮內(nèi)膜間質(zhì)內(nèi)含有少量排列整齊的藍色膠原纖維。隨著治療時間的延長，三個治療組子宮內(nèi)膜纖維化程度逐漸減輕。
　　5.各組子宮內(nèi)膜TGF-β1蛋白水平表達分析
　　TGF-β1蛋白在子宮內(nèi)膜腔上皮、腺上皮及間質(zhì)中均有表達，呈棕黃色顆粒狀。
　　結(jié)論:
　　1.機械和感染雙重損傷法

8、可構(gòu)建相對穩(wěn)定的新西蘭大白兔IUA動物模型，重復(fù)性好，可通過此模型評價Interceed聯(lián)合雌激素治療官腔粘連的療效。
　　2.Interceed用于兔宮腔后無炎癥等反應(yīng)，對正常子宮內(nèi)膜也無不良影響。
　　3.Interceed治療組、雌激素治療組和聯(lián)合治療組，三種方法治療IUA后均可在一定程度上逆轉(zhuǎn)子宮內(nèi)膜腺體數(shù)量的表達、子宮內(nèi)膜間質(zhì)纖維化程度和子宮內(nèi)膜TGF-β1蛋白的表達，其中以聯(lián)合治療方法效果最佳。
　　第二章

9、 Interceed聯(lián)合雌激素治療兔官腔粘連對子宮內(nèi)膜容受性影響的研究
　　目的:
　　采用機械和感染雙重損傷法構(gòu)建新西蘭大白兔IUA動物模型，給予官腔內(nèi)置入Interceed和肌注雌激素聯(lián)合治療，通過觀察雌兔著床窗期子宮內(nèi)膜胞飲突和整合素αvβ3蛋白的表達情況，探討其對子宮內(nèi)膜容受性的影響，為臨床治療提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.健康成年雌性未孕普通級新西蘭大白兔144只，隨機分為6組，每組各24只，各組

10、建模及治療方法同第一章。①正常對照組;②Interceed對照組;③模型組;④Interceed治療組;⑤雌激素治療組;⑥聯(lián)合治療組。治療后第2w開始觀察各組雌兔2個正常發(fā)情周期（8d～15d/周期），于發(fā)情期用消毒過的圓滑玻璃棒涂上甘油刺激雌兔的陰道，誘發(fā)排卵形成雌兔假孕模型。
　　2.分別在假孕后第6d、7d、8d各組各處死8只雌兔，立即剖腹取出雙側(cè)子宮，所得標本分為2份:一份縱行剖開，用PBS液反復(fù)沖洗宮腔數(shù)次，固定于2.5

11、％戊二醛溶液中行掃描電鏡觀察子宮內(nèi)膜上胞飲突的表達;一份用4％多聚甲醛固定24h，行IHC染色觀察子宮內(nèi)膜上整合素αvβ3的蛋白表達。
　　3.采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，所有實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差表示，進行方差齊性檢驗，多組間比較采用單因素方差分析(One-Way ANOVA)，各組間兩兩比較:若符合方差齊性，則采用LSD檢驗;若不符合方差齊性，則采用Tamhane's檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

12、>　　結(jié)果:
　　1.各組雌兔著床窗期子宮內(nèi)膜胞飲突的表達
　　掃描電鏡下見在胞飲突發(fā)育之前，子宮內(nèi)膜表面由含有微絨毛的無纖毛細胞覆蓋。胞飲突在子宮內(nèi)膜表面呈較大的蘑菇樣突起。
　　2.各組著床窗期子宮內(nèi)膜上整合素αvβ3蛋白的表達
　　在著床期，整合素αvβ3表達于子宮內(nèi)膜的腔上皮與腺上皮的胞漿中，且表達強弱不一。
　　結(jié)論:
　　1.模型組子宮內(nèi)膜胞飲突表達呈微量局灶性分布、子宮內(nèi)膜整合素αvβ3

13、蛋白表達顯著降低，提示機械和感染雙重損傷子宮內(nèi)膜后容受性降低。
　　2.Interceed對照組子宮內(nèi)膜上整合素αvβ3蛋白的表達和胞飲突的表達、發(fā)育與正常對照組相似，提示Interceed對正常子宮內(nèi)膜容受性無明顯不良影響。
　　3.Interceed治療組、雌激素治療組和聯(lián)合治療組，3種方法治療IUA后均可在一定程度上增加子宮內(nèi)膜整合素αvβ3蛋白的表達和改善子宮內(nèi)膜胞飲突的表達和發(fā)育。
　　4.聯(lián)合治療組治療IU