糖皮質激素受體與脊髓小膠質細胞參與神經病理性疼痛的機制研究.pdf

1、背景:
　　神經系統(tǒng)原發(fā)性損害和功能障礙所激發(fā)或引起的疼痛稱之為神經病理性疼痛（Neuropathic Pain，NPP）。神經病理性疼痛是一種慢性疼痛，對人們的影響具有長期性和破壞性，并伴隨痛覺范圍擴大、敏感性增強等特點，但目前對神經病理性疼痛的治療仍然缺乏有效的方法。因此，對神經病理性疼痛的機制研究顯得尤為重要。
　　當機體受到如創(chuàng)傷、感染等刺激時，外周傷害性感受器可將其經外周神經傳入背根神經節(jié)至脊髓背角，進而交叉上行至

2、大腦皮層，產生疼痛的感覺。在此過程中存在多種電化學信號，如各種炎性介質、神經遞質的釋放，最終導致中樞敏化，痛閾降低，痛覺敏感。既往對神經病理性疼痛的研究多集中于外周神經系統(tǒng)及中樞神經系統(tǒng)中神經元敏感化、突觸重塑等作用，而對膠質細胞活化的研究較少。
　　近年來諸多研究表明，在外周神經損傷模型、外周炎性疼痛模型以及癌痛模型中，脊髓背角膠質細胞均有不同程度的活化，表明脊髓膠質細胞的活化在神經病理性疼痛中占有至關重要的地位。糖皮質激素是正

3、常人體內的重要生理物質，在機體中發(fā)揮廣泛作用，包括抗炎、抗休克、抗毒等。糖皮質激素受體GR(Glucocorticoid Receptor)是一種激素依賴性轉錄調節(jié)因子。GR廣泛表達于外周神經系統(tǒng)和中樞神經系統(tǒng)中，并且GR在傷害性信息傳遞及中樞敏化過程中起著重要作用，但GR在中樞神經系統(tǒng)中的作用存有爭議。在外周神經損傷模型中，GR及脊髓小膠質細胞是如何發(fā)揮作用的，兩者之間是否存在關系，都需要深入研究。
　　本研究通過建立坐骨神經分

4、支選擇性損傷（SNI）模型，研究大鼠脊髓背角小膠質細胞的活化狀態(tài)及GR的表達情況。蛛網膜下腔注射GR的激動劑地塞米松（Dexamethasone、Dex）、GR的拮抗劑RU38486及脊髓小膠質細胞的抑制劑氟代檸檬酸（Fluorocitrate、FC）后，觀察大鼠的痛行為變化，并檢測脊髓背角小膠質細胞OX42及GR的表達變化，從而探討外周神經損傷所致神經病理性疼痛的可能發(fā)生機制，對其治療提供理論依據。
　　目的:
　　建立S

5、NI大鼠神經病理性疼痛模型，觀察SNI大鼠痛行為的變化和脊髓GR蛋白表達水平；通過蛛網膜下腔注射Dex、RU38486，分別激動或抑制糖皮質激素受體GR的表達，檢測SNI大鼠痛行為的變化及Western-blot中GR的表達變化，進一步驗證GR在神經病理性疼痛中的參與作用。
　　通過免疫熒光雙標對 SNI大鼠脊髓中GR及小膠質細胞進行定位，并蛛網膜下腔注射小膠質細胞的抑制劑FC，觀察SNI大鼠痛行為的變化，并探究神經病理性疼痛中G

6、R與脊髓小膠質細胞的關系。
　　材料和方法:
　　1.分組：90只雄性SD大鼠隨機分為9組：模型組（SNI組，n=24）和假手術組（Sham組，n=24）；SNI+Dex組(n=6）、SNI+NS組（n=6）和SNI+RU38486組（n=6），RU38486組（n=6）和 NS組（n=6）；SNI+FC組(n=6）和SNI+NS組（n=6）。
　　2.SNI模型的建立：大鼠稱重后腹腔注射10％水合氯醛麻醉。切開皮膚后

7、逐層分離，充分暴露坐骨神經及其分支，選擇性結扎脛神經和腓總神經，并剪斷去除部分神經干。Sham組只暴露不結扎神經分支。
　　3.蛛網膜下腔置管：在L5-L6關節(jié)突結合處刺入硬脊膜內，輕夾PE10導管前端將導管向上置入，導管內有清亮的腦脊液流出或出現甩尾、抖動反射，表明蛛網膜下腔置管成功。
　　4.痛行為測定：SNI組和Sham組均在術前1天、術后3、7、14、21天測定50%縮足閾值。SNI+Dex組、SNI+NS組和SNI

8、+RU38486組測定術前1天、術后3、7、9至13天的50%縮足閾值；RU38486組和NS組測定置管前1天、置管后5至10天的50%縮足閾值。SNI+FC組和SNI+NS組于術前1天、術后3、7、9至13天分別測定兩組大鼠的50%縮足閾值。
　　5.免疫熒光雙標：于術后14天檢測SNI組和Sham組脊髓小膠質細胞OX42與糖皮質激素受體GR的表達變化及共表達情況。檢測SNI+FC組和SNI+NS組術后13天GR的表達情況。

9、r>　　6.Western-blot：檢測SNI組和Sham組術后14天及SNI+Dex組、SNI+NS組和SNI+RU38486組術后13天脊髓GR蛋白的表達情況。
　　結果:
　　1.與Sham組相比，SNI組大鼠術后50%縮足閾值顯著降低（P<0.05）；Western-blot顯示，SNI組大鼠術后GR的蛋白水平顯著降低（P<0.05）。
　　2.蛛網膜下腔注射Dex后SNI大鼠的痛行為得到明顯緩解，與SNI+

10、NS組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；而給予RU38486不會進一步加劇疼痛（P>0.05）。在正常大鼠體內給予RU38486可使50%縮足閾值降低（P<0.05），導致疼痛。與SNI+NS組相比，Western-blot顯示：SNI+Dex組大鼠術后GR的蛋白水平顯著增高（P<0.05），SNI+RU38486組顯著降低（P<0.05）。
　　3.免疫熒光顯示，術后SNI組大鼠GR的表達減低，OX42表達增高，與Sham

11、組相比，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；且GR與脊髓小膠質細胞共表達。
　　4.與SNI+NS組相比，SNI+FC組大鼠術后50%縮足閾值顯著增加（P<0.05）；免疫熒光顯示，術后SNI+FC組大鼠OX42表達降低，GR的表達增加，與SNI+NS組相比差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　結論:
　　1.糖皮質激素受體激活后可緩解坐骨神經分支選擇性損傷大鼠的痛行為，可能在神經病理性疼痛的調控中發(fā)揮作用。