清熱透表方抗流感病毒FM1的作用及其免疫機(jī)制.pdf

1、目的：
　　通過觀察清肺透表方對(duì)甲型流感病毒FM1感染小鼠的預(yù)防治療作用，并以先天性免疫應(yīng)答中重要的模式識(shí)別受體TLR7作為研究靶點(diǎn)，重點(diǎn)探討清熱透表方抗流感病毒的作用機(jī)制，為中醫(yī)藥抗流感病毒的理論研究及臨床應(yīng)用提供重要依據(jù)。
　　方法：
　　1)采用滴鼻法建立流感病毒肺損傷小鼠模型，觀察藥物對(duì)流感病毒肺損傷小鼠的死亡保護(hù)率及肺指數(shù)，并采用HE染色法觀察小鼠肺組織病理變化，用以評(píng)價(jià)藥物在小鼠體內(nèi)抗流感病毒的作用。

2、>　　2)采用ELISA法檢測(cè)流感病毒肺損傷小鼠血清中IL-1β、TNF-α、IL-6的含量，用以評(píng)價(jià)藥物對(duì)感染流感病毒后炎性因子的抑制作用。
　　3)采用熒光定量PCR和western-blot技術(shù)，檢測(cè)流感病毒肺損傷小鼠肺組織中TLR7、MyD88、NF-κB、AP-1mRNA和蛋白表達(dá)水平，并評(píng)價(jià)藥物對(duì)感染流感病毒肺組織中以TLR7介導(dǎo)的信號(hào)通路的影響。
　　結(jié)果：
　　1)與模型組相比，清熱透表方高、中劑量組可

3、以有效降低小鼠死亡率，提高小鼠死亡保護(hù)率，改善生存狀況，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05），而低劑量組可能因?yàn)樗幬飫┝坎蛔?，?duì)小鼠死亡保護(hù)作用不明顯;并且清熱透表方各劑量組與模型組相比均可以降低流感病毒小鼠的肺指數(shù)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01或P＜0.05);鏡下觀提示該方對(duì)流感病毒所致病毒性肺損傷有不同程度的改善作用，使得淋巴等炎性細(xì)胞減少，浸潤(rùn)減輕，肺泡壁充血擴(kuò)張及脫落的上皮細(xì)胞減少。
　　2)與模型組相

4、比，清熱透表方各劑量組均可以有效的降低流感病毒小鼠血清中IL-1β、TNF-α、IL-6的分泌水平，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05），說明該方可以有效抑制流感病毒感染后促炎因子IL-1β、TNF-α、IL-6分泌水平，避免因炎性細(xì)胞過度表達(dá)而引起的免疫損傷，減輕對(duì)機(jī)體的損害，并且存在一定的量效關(guān)系。
　　3)清熱透表方高、中劑量組均可以下調(diào)TLR7、MyD88、NF-κB、AP-1 mRNA及蛋白的表達(dá)，與模型組相

5、比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05)，但清熱透表方低劑量組與模型組相比無顯著差異（P＞0.05），提示該方高、中劑量可以通過下調(diào)TLR7介導(dǎo)的MyD88依賴的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制下游炎性細(xì)胞因子表達(dá)，從而發(fā)揮抗病毒作用。
　　結(jié)論：
　　清熱透表方可以有效地抑制甲型流感病毒FM1在小鼠體內(nèi)的增殖，顯著降低促炎因子的釋放，減輕肺組織炎性病理損傷，其抗流感病毒的機(jī)制可能為下調(diào)TLR7介導(dǎo)的MyD88依賴的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑