海水浸泡后切口牽拉痛大鼠疼痛行為的變化及其機(jī)理的探討.pdf

1、目的:
　　1.觀察海水浸泡對切口牽拉痛(SMIR)大鼠疼痛行為的影響，進(jìn)一步研究其疼痛性質(zhì)，并探討其內(nèi)在機(jī)理與神經(jīng)形態(tài)學(xué)改變的關(guān)系。
　　2.探討海水浸泡后SMIR模型大鼠疼痛行為改變與背根神經(jīng)節(jié)\脊髓TRPV1、小膠質(zhì)細(xì)胞激活的相關(guān)性，進(jìn)一步探討其內(nèi)在機(jī)制。
　　3.不同沖洗液對海水浸泡后的SMIR模型大鼠術(shù)后疼痛行為和切口愈合時間的影響。
　　方法:
　　1.不同時間海水浸泡后SMIR模型大鼠疼痛行為

2、變化的觀察:24只健康雄性SD實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為四組:SMIR組（只建立SMIR模型）、SI5組（建立SMIR模型后，局部傷口予以海水浸泡5分鐘）、SI20組（建立SMIR模型后，局部傷口予海水浸泡30分鐘）、SI60組（建立SMIR模型后，局部傷口予海水浸泡60分鐘）。于術(shù)后1d、3d、5d、7d、14d、21d、35d測定各組大鼠50％的機(jī)械縮足反射閾值(PMWT)和熱痛閾值(PTWL)。
　　2.觀察海水浸泡后SMIR模型大鼠

3、疼痛行為變化的神經(jīng)形態(tài)學(xué)改變:選用健康雄性SD大鼠48只，基礎(chǔ)痛閾值篩選后，隨機(jī)分為三組:模型組(MC組)、生理鹽水浸泡組(NS組)、海水浸泡組（SW組），建立SMIR模型后，生理鹽水浸泡組大鼠切口予生理鹽水浸泡60分鐘;海水浸泡組予海水浸泡60分鐘;模型組建立模型后不做特殊處理。于術(shù)后1d、3d、5d、7d、14d、21d、35d測定各組大鼠50％的機(jī)械縮足反射閾值(PMWT)和熱痛閾值(PTWL)。每組分別于術(shù)后3d、35d隨機(jī)選取

4、4只大鼠，處死后取術(shù)側(cè)隱神經(jīng)做HE染色、術(shù)側(cè)背根神經(jīng)節(jié)應(yīng)用電鏡技術(shù)觀察其超微結(jié)構(gòu)的改變。觀察記錄術(shù)口愈合時間。
　　3.背根神經(jīng)節(jié)\脊髓TRPV1的表達(dá)及小膠質(zhì)細(xì)胞激活的情況與疼痛行為學(xué)改變的關(guān)系:分別于術(shù)后3d、35d隨機(jī)選取MC組、NS組、SW組各4只大鼠，處死后取術(shù)側(cè)背根神經(jīng)節(jié)和腰膨大處脊髓背角做免疫組化實(shí)驗(yàn)測定TRPV1的表達(dá)情況，并運(yùn)用免疫熒光染色方法標(biāo)記OX-42測定背根神經(jīng)節(jié)和腰膨大處脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞的活化水平。<

5、br>　　4.觀察不同沖洗液對海水浸泡后SMIR模型大鼠術(shù)后疼痛行為和術(shù)口愈合時間的影響:選用健康雄性SD大鼠48只，篩選其基礎(chǔ)痛閾值后隨機(jī)分為海水浸泡組(SW組)、海水浸泡+蒸餾水沖洗組（SW+DW組）、海水浸泡+低滲透鹽水沖洗組(SW+HS組)、海水浸泡+生理鹽水沖洗組(SW+NS組)，建立SMIR模型后，除海水浸泡組外，其余各組分別予蒸餾水、低滲透鹽水、生理鹽水沖洗。于術(shù)后于術(shù)后1d、3d、5d、7d、14d、21d、35d測定各

6、組大鼠50％的機(jī)械縮足反射閾值(PMWT)和熱痛閾值(PTWL)。實(shí)驗(yàn)過程觀察大鼠的一般情況，并記錄大鼠術(shù)口的愈合時間。
　　結(jié)果:
　　1.SI5組術(shù)后第一天的術(shù)側(cè)PMWT值與SMIR組比較明顯降低(P＜0.05)。與SMIR組比較，SI20組術(shù)后1d、3d、5d、7d對應(yīng)的術(shù)側(cè)PMWT值下降(P＜0.05)。SMIR組、SI5組、SI20組均能于術(shù)后35d恢復(fù)術(shù)側(cè)的基礎(chǔ)PMWT值水平。SI60組術(shù)后1d至35d各時間點(diǎn)的

7、術(shù)側(cè)PMWT值均較SMIR組和SI5組下降(P＜0.05);而與SI20比較，SI60組術(shù)后1d、14d、21d、35d術(shù)側(cè)PMWT值均下降(P＜0.05)，且術(shù)后35d不能恢復(fù)到術(shù)前基礎(chǔ)MWT值。SMIR組、SI5組、SI20組各時點(diǎn)對側(cè)PMWT值與造模前比較未見明顯差異。SI60組術(shù)后1d至14d各時點(diǎn)對側(cè)PMWT值與SMIR組、SI5組、SI20組及D0時點(diǎn)比較均明顯下降(P＜0.05)，術(shù)后21d恢復(fù)基礎(chǔ)水平。SMIR組、SI5

8、組、SI20組各時間點(diǎn)術(shù)側(cè)和對側(cè)PTWL值差異無統(tǒng)計學(xué)意義;SI60組術(shù)后1d至14d各時點(diǎn)術(shù)側(cè)PTWL值比SMIR組、SI5組、SI20組及造模前稍有降低(P＜0.05);而其對側(cè)術(shù)后1d、3d、5d、7d的PTWL值亦較SMIR組、SI5組、SI20組及造模前稍降低(P＜0.05)。
　　2.SW組術(shù)后1d至35d內(nèi)對應(yīng)觀察時點(diǎn)的術(shù)側(cè)PMWT值與NS組和SW組比較均明顯降低(P＜0.05)，且術(shù)后35d不能恢復(fù)到術(shù)前基礎(chǔ)MWT

9、值;SW組術(shù)后第一天至第21天對側(cè)的PMWT值與基礎(chǔ)值比較均明顯下降(P＜0.05)，其術(shù)后對側(cè)PMWT值與MC組、NS組比較均明顯降低(P＜0.05)，術(shù)后35天恢復(fù)基礎(chǔ)機(jī)械痛閾值水平。SW組術(shù)后第1至第14天各時間點(diǎn)的術(shù)側(cè)PTWL值均比造模前和MC組、NS組明顯降低(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，而其對側(cè)第1、3、5、7天的PTWL值亦較造模前和MC組、NS組稍降低，MC組、NS組各時間點(diǎn)術(shù)側(cè)和對側(cè)PTWL值差異無統(tǒng)計學(xué)意義;<

10、br>　　3.MC組和NS組術(shù)后3d、35d的隱神經(jīng)外膜光滑完整，與神經(jīng)纖維緊密連接，神經(jīng)纖維排列緊密。SW組術(shù)后3d隱神經(jīng)術(shù)隱神經(jīng)外膜明顯褶皺，與神經(jīng)纖維間隙增寬，神經(jīng)纖維變細(xì)排列松散、部分神經(jīng)纖維缺失，纖維密度不均勻;SW組術(shù)后35d隱神經(jīng)外膜稍有褶皺，神經(jīng)纖維變細(xì)，波浪樣松散排列，密度均勻。MC組和NS組術(shù)后3d、35d背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元偶見個別腫脹的線粒體和自噬小體，線粒體嵴清晰可見。SW組術(shù)后3d可見大量的空泡化的線粒體和自噬小

11、體或自噬小泡，線粒體嵴消失，術(shù)后35d，神經(jīng)元內(nèi)可見少量腫脹的線粒體及自噬小體，線粒體嵴模糊不清。SW組術(shù)后第3天及術(shù)后第35天背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元內(nèi)異常線粒體及溶酶體計數(shù)均比MC組、NS組顯著增高(P＜0.05)，對比術(shù)后第三天，三組術(shù)后第35天異常線粒體和溶酶體數(shù)量均有明顯下降(P＜0.05)。MC組和NS組大鼠均能在7天左右愈合，而SW組則需約9天愈合，平均延長愈合2天(P＜0.05)。
　　4.SW組術(shù)后第3天及第35天術(shù)側(cè)背

12、根神經(jīng)節(jié)/腰膨大處脊髓背角上TRPV1累積光密度值要明顯大于MC組和NS組(P＜0.05)。對比術(shù)后第3天，三組術(shù)后第28天TRPV1的累計光密度值均下降(P＜0.05)。術(shù)后第3天及第35天，SW組術(shù)側(cè)背根神經(jīng)節(jié)及腰膨大處脊髓背角上小膠質(zhì)細(xì)胞特異性標(biāo)志蛋白OX-42的平均光密度值要明顯大于MC組和NS組(P＜0.05)
　　5.與造模前基礎(chǔ)機(jī)械痛閾值比較，四組大鼠術(shù)后第1天至35天的術(shù)側(cè)PMWT值均下降(P＜0.05)，與SW組

13、比較，SW+DW組、SW+HS組、SW+NS組術(shù)后第1至第35天術(shù)側(cè)對應(yīng)的PMWT值均升高(P＜0.05);而與SW+DW組、SW+HS組比較， SW+NS組術(shù)后第1至第35天術(shù)側(cè)各時間點(diǎn)對應(yīng)的PMWT值均升高(P＜0.05)。與造模前基礎(chǔ)PMWT值比較，SW組比較、SW+DW組、SW+HS組、SW+NS組術(shù)后第1天至第7天對側(cè)PMWT值均有不同程度的下降(P＜0.05)，與SW組比較，SW+DW組術(shù)后第1天及第7天的對側(cè)PMWT值明顯

14、較高(P＜0.05)，SW+NS組術(shù)后第1至第7天各時點(diǎn)對應(yīng)的PMWT值均比SW組降低(P＜0.05); SW+DW組和SW+HS組術(shù)后各時間點(diǎn)對側(cè)PMWT值比較無差異，而SW+NS組組術(shù)后術(shù)后第1天、第3天、第5天的PMWT值均比SW+DW組和SW+HS組顯著升高(P＜0.05)。SW+DW組、SW+HS組、SW+NS組術(shù)后第一天至第14天各時點(diǎn)的術(shù)側(cè)PTWL值與比SW組比較均升高(P＜0.05)，SW+NS組術(shù)后第1天至第7天術(shù)側(cè)對

15、應(yīng)PTWL值均比SW+DW組、SW+HS組高(P＜0.05)。SW+NS組術(shù)后各時點(diǎn)對應(yīng)對側(cè)PTWL值與基礎(chǔ)水平相當(dāng)無明顯差異，SW+NS組術(shù)后各第一天、第3天、第5天與SW組、SW+DW組、SW+HS組比較明顯升高(P＜0.05)。SW組、SW+DW組、SW+HS組三組愈合時間無差異，而SW+NS組愈合時間要比SW組、SW+DW組、SW+HS組約提前2天。
　　結(jié)論:
　　短時間（5分鐘、20分鐘）海水浸泡會降低SMIR模

16、型大鼠急性期（術(shù)后前三天）同側(cè)機(jī)械痛閾值水平，長時間（60分鐘）海水浸泡可以加劇SMIR模型大鼠的疼痛情況，術(shù)側(cè)足出現(xiàn)持續(xù)性痛覺過敏，對側(cè)組出現(xiàn)鏡像痛。海水浸泡(60分鐘)導(dǎo)致大鼠外周神經(jīng)損傷、背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)的改變可能參與了疼痛加重和神經(jīng)病理疼痛產(chǎn)生的過程。脊髓背角和背根神經(jīng)節(jié)TRPV1過度表達(dá)使小膠質(zhì)細(xì)胞持續(xù)活化的通路可能是這種疼痛持續(xù)的內(nèi)在機(jī)制;長時間海水浸泡（60分鐘）會延遲SMIR模型大鼠切口的愈合，即刻的沖洗不僅可以