雞尾酒療法作用肝纖維化大鼠的肝組織定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的:研究EGCG、Taurine和Genistein組成的雞尾酒作用肝纖維化大鼠后，分析和鑒定肝組織中差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，探討雞尾酒療法抗肝纖維化作用的蛋白質(zhì)基礎(chǔ)及分子機制，以期為肝纖維化的診斷、治療和預(yù)后尋找可靠的生物標(biāo)志物并為下一步實驗奠定基礎(chǔ)。
　　方法:(1)以CCL4誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型，在造模成功后給予雞尾酒藥物治療，分為中劑量組(牛磺酸100mg/kg+EGCG15mg/kg+三羥基異黃酮10mg/kg)和高劑量組(

2、?；撬?00mg/kg+EGCG30mg/kg+三羥基異黃酮20mg/kg)，用藥六周末，處死大鼠，取大鼠肝組織。(2)選取肝右葉相同部位組織經(jīng)10％甲醛固定，蠟塊包埋，HE染色，光學(xué)顯微鏡下應(yīng)用DMR+Q550圖像分析儀進行病理學(xué)觀察;(3)提取肝組織蛋白，采用同位素iTRAQ試劑標(biāo)記CCL4模型組及雞尾酒的中、高劑量組的肝組織全蛋白，經(jīng)SCX分離和LC-ESI-MS/MS分析后，將得到的質(zhì)譜數(shù)據(jù)進行蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫搜索鑒定差異表達(dá)的蛋白

3、，利用生物信息學(xué)方法對差異蛋白進行分析。
　　結(jié)果:(1)病理結(jié)果顯示雞尾酒療法各劑量組大鼠肝纖維程度均有不同程度的減輕，肝小葉結(jié)構(gòu)基本完整;(2)以變化倍數(shù)大于1.5倍或者小于0.67倍的蛋白為差異表達(dá)蛋白的標(biāo)準(zhǔn)，與CCl4模型組相比，雞尾酒組共鑒定到192種差異蛋白質(zhì)，其中雞尾酒中劑量組共發(fā)現(xiàn)135個差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，55個下調(diào)，80個上調(diào);雞尾酒高劑量組共發(fā)現(xiàn)125個差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，36個下調(diào)，89個上調(diào)。在兩個給藥劑量組

4、與CCl4模型組的比值中上、下調(diào)一致的差異蛋白共68個，同時上調(diào)的蛋白46個，同時下調(diào)的蛋白22個。通過對這些差異蛋白分別進行GO、pathway和蛋白互作分析發(fā)現(xiàn)其參與翻譯后修飾、轉(zhuǎn)錄、重組和信號傳導(dǎo)通路等過程。
　　結(jié)論:?；撬?、EGCG和三羥基異黃酮組成的雞尾酒藥物作用肝纖維化的SD大鼠后，大鼠肝組織中參與重要生物信號途徑的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶、Ras相關(guān)蛋白、VitA結(jié)合蛋白、細(xì)胞色素P450、組織蛋白酶D、L蛋白等蛋白