雄激素受體剪切變異體7在前列腺癌去勢(shì)抵抗中的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　1、建立耐Enzalutamide前列腺癌ENZ-R-LNCaP細(xì)胞模型，并驗(yàn)證雄激素受體剪切變異體7（AR-V7）在ENZ-R-LNCaP細(xì)胞的表達(dá)。
　　2、免疫組化驗(yàn)證AR-V7在低、中、高危前列腺癌標(biāo)本中的表達(dá)情況。
　　方法：
　　1、于含活性炭/葡聚糖處理過的胎牛血清培養(yǎng)基培養(yǎng)前列腺癌LNCaP細(xì)胞，其中加入0.1、0.3、1.0uM三個(gè)不同濃度二代雄激素受體拮抗劑Enzalutamide

2、（MDV3100），進(jìn)行連續(xù)傳代培養(yǎng)，建立耐Enzalutamide的ENZ-R-LNCaP細(xì)胞模型，倒置顯微鏡下觀察LNCaP細(xì)胞在無雄激素下的生長(zhǎng)狀態(tài)以及其形態(tài)的變化，并運(yùn)用westernblot技術(shù)檢測(cè)前列腺癌LNCaP細(xì)胞AR-FL及AR-V7蛋白表達(dá)變化。
　　2、根據(jù)2015年歐洲泌尿外科學(xué)會(huì)(EuropeanAssociationOfUrology，EUA)標(biāo)準(zhǔn)，收集南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院泌尿外科前列腺癌術(shù)后臨床組織標(biāo)

3、本40例，其中低危10例，中、高危組各15例，運(yùn)用免疫組化染色方法，分別檢測(cè)在不同危險(xiǎn)度前列腺癌標(biāo)本AR-V7蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、LNCaP細(xì)胞在活性炭/葡聚糖處理過的胎牛血清培養(yǎng)液+Enzalutamide中，初期（3代）生長(zhǎng)受到明顯抑制，表現(xiàn)為細(xì)胞難以貼壁，出現(xiàn)大量細(xì)胞死亡，僅少數(shù)存活，開始向周圍伸出突起；約傳至9代后可見細(xì)胞逐漸向周圍伸出較多突起，并相互聯(lián)系成網(wǎng)狀，細(xì)胞呈自分泌狀態(tài)；當(dāng)繼續(xù)培養(yǎng)到12代時(shí)，

4、細(xì)胞不再呈自分泌狀態(tài)，隨著細(xì)胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)4個(gè)月后LNCaP細(xì)胞呈鋪開樣生長(zhǎng)，且細(xì)胞狀態(tài)及形態(tài)發(fā)生了變化，細(xì)胞體積變小，呈圓形或梭形，細(xì)胞突觸較少。
　　2、westernblot檢測(cè)AR-FL和AR-V7：加0.1,0.3,1.0uMEnzalutamide（MDV3100）的三個(gè)實(shí)驗(yàn)組與未加Enzalutamide組比較，AR-V7蛋白表達(dá)呈顯著上調(diào)（P＜0.05），且在不同劑量下表達(dá)差異明顯（P＜0.05）。
　　3、

5、免疫組化顯示：結(jié)果示AR-V7絕大多數(shù)表達(dá)于細(xì)胞核內(nèi)，僅少量表達(dá)于胞質(zhì)中；40例前列腺癌標(biāo)本AR-V7有19例陽(yáng)性表達(dá)，總陽(yáng)性表達(dá)率47.5％（19/40），其中低危陽(yáng)性表達(dá)為20%（2/10）、中危陽(yáng)性表達(dá)40%（6/15）及高危陽(yáng)性表達(dá)73.3%(11/15)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、在含活性炭/葡聚糖處理的胎牛血清培養(yǎng)液中加入雄激素受體阻斷劑Enzalutamide，對(duì)前列腺癌細(xì)胞LNC