液泡膜ATP酶亞基通過使巨噬細胞極化調(diào)節(jié)胃癌細胞的生物學行為.pdf

1、目的：探討液泡膜ATP酶亞基的N末端結構域（a2NTD）在調(diào)節(jié)巨噬細胞極化方面的作用，以及極化的巨噬細胞對胃癌細胞生物學行為的影響。
　　方法：利用Ficoll密度梯度離心法分離提取健康人外周血中單個核細胞，誘導培養(yǎng)巨噬細胞后分為4組：M-CSF組（rhM-CSF100ng/mL+RPMI1640），a2NTD組（rha2NTD500ng/mL+RPMI1640），a2NTD+M-CSF組（rha2NTD500 ng/mL+rhM

2、-CSF100ng/mL+RPMI1640）和對照組(僅RPMI1640)，刺激48h后以雙重免疫熒光標記法檢測巨噬細胞膜表面抗原的表達，以ELISA法檢測細胞因子IL-10和IL-12的分泌情況。通過transwell共培養(yǎng)系統(tǒng)將a2NTD組（rha2NTD500ng/mL+ RPMI1640），對照組（僅RPMI1640），空白組（不接種細胞）和胃癌細胞SGC-7901共培養(yǎng)，用CCK-8法檢測巨噬細胞對胃癌SGC-7901細胞增殖

3、能力的影響，Hoechst染色檢測胃癌SGC-7901細胞的凋亡情況，transwell侵襲實驗檢測胃癌SGC-7901細胞的侵襲力。
　　結果：CD68在4組巨噬細胞的細胞膜上均有表達（＋），平均吸光度值（MD值）分別為：對照組0.092±0.005，M-CSF組0.095±0.006，a2NTD組0.094±0.005，a2NTD+M-CSF組0.094±0.005，兩兩比較，差別無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。CD206在對照

4、組弱表達（－），MD值為：0.025±0.004；在M-CSF組和a2NTD組均有表達（＋），MD值分別為：0.191±0.012和0.197±0.136；在a2NTD+M-CSF組超強表達（＋＋＋），MD值為：0.285±0.011。除M-CSF組和a2NTD組差別無統(tǒng)計學意義（P>0.05），其余各組兩兩比較，差別均有統(tǒng)計學意義（均 P<0.01）。M-CSF組和a2NTD組細胞分泌IL-10水平分別為（85.65±13.64）ng

5、/L和（87.77±14.25）ng/L均高于對照組[（71.67±7.56）ng/L，P<0.01]，分泌Il-12水平分別為均（9.91±1.50）ng/L和（10.15±1.80）ng/L均低于對照組[（16.87±1.10）ng/L，P<0.01]；a2NTD+M-CSF組分泌IL-10水平為（116.98±14.27）ng/L，高于其余各組（均P<0.01），分泌IL-12水平（5.31±0.88）ng/L，低于其余各組（均P

6、<0.01）。各組巨噬細胞對胃癌SGC-7901細胞的增殖均有促進作用，且a2NTD組巨噬細胞對胃癌SGC-7901細胞的增殖速度的促進作用明顯強于空白組和對照組（均 P<0.001)。胃癌SGC-7901細胞的凋亡率在各組間比較均有統(tǒng)計學意義(均P<0.01)，且a2NTD組胃癌SGC-7901細胞凋亡率明顯低于對照組和空白組(均 P<0.01)。各組間相對穿膜細胞數(shù)比較,差異均有統(tǒng)計學意義（均P<0.001)，且空白組和對照組胃癌細