乳腺癌X線斷層征象與Survivin的相關性研究.pdf

1、背景
　　乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，近年來，乳腺癌的發(fā)病率及死亡率在全球范圍內均呈上升趨勢，每年乳腺癌以大約2％-3%的速度遞增，且發(fā)病年齡逐漸年輕化，嚴重危害女性的健康，因此，早期發(fā)現(xiàn)及診斷、以及早期的治療對提高乳腺癌的生存率以及降低其死亡率至關重要。醫(yī)學影像學，在乳腺癌的檢出以及診斷方面，具有重要價值。目前，應用于臨床的影像學檢查方法有數字化乳腺X線攝影、超聲檢查、磁共振成像等，影像學檢查方法的臨床應用，使乳腺癌的檢出

2、率與診斷準確性得到大幅提升。數字乳腺三維斷層攝影(Digital breast tomography，DBT)應運而生。數字乳腺三維斷層攝影作為一種新的技術，不但有效的避免了傳統(tǒng)全視野數字乳腺 X線攝影(Full-filled digital mammography，F(xiàn)FDM)因過度擠壓而造成的受檢者不適感的問題，還有效的解決了傳統(tǒng)FFDM圖像中因乳腺組織重疊對病變的遮蔽的影響[1]，目前，DBT在臨床上得到廣泛的認可及應用研究。國內外

3、大量研究表明，DBT在發(fā)現(xiàn)疾病、診斷疾病等方面明顯優(yōu)于 FFDM，在展示病變的影像特征及細節(jié)方面明顯優(yōu)于FFDM。
　　目前，對腫瘤的病因、發(fā)生以及發(fā)展機制的探索，已經深入到分子生物學及基因水平。大量研究表明，一些激素受體、癌基因及抑癌基因、細胞因子等，會對腫瘤的生物學行為產生影響，從而決定腫瘤的生長方式、形態(tài)特點以及惡性程度、復發(fā)、轉移等。腫瘤的分子生物學特性決定其組織病理的大體形態(tài)改變，從而決定了醫(yī)學影像學的表現(xiàn)。
　　

4、目前，越來越多的學者對miRNA進行廣泛、深入的研究，尤其在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程方面，以及腫瘤的浸潤、轉移方面，進行深入的、多方面的研究。目前，對miRNA的研究已經成為研究熱點，貫穿于分子生物學、臨床醫(yī)學以及遺傳學等多個專業(yè)領域。據大量的研究推測，microRNA參與了大約三分之一的人類基因編碼的mRNA的負調控[2,3]。研究還發(fā)現(xiàn)，miRNAs與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、以及浸潤轉移密切相關。miRNAs可發(fā)揮癌基因、或抑癌基因的作用，又或

5、同時具有兩種功能[4]。另有研究表明，miRNAs是早期診斷腫瘤以及判斷腫瘤預后的重要的分子標記，可候選靶標進行治療干預，并成為生物醫(yī)學的重要研究對象。因此，研究 miRNAs在惡性腫瘤中的表達，在診斷腫瘤以及判斷腫瘤的預后方面具有意義重大[5]。
　　MiRNA143位于人類染色體5q32，其成熟體序列為5’-UGAGAUGAAGCAC UGUAGCUC-3’。在miRNA143的研究中發(fā)現(xiàn)，其在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用

6、。研究提示，miRNA143可能直接、或間接靶向轉錄因子及細胞因子，從而發(fā)揮調控作用，但具體的調控機理尚有待于進一步的研究。有研究證實，上調 miRNA143的表達不僅可抑制宮頸鱗癌的細胞的增殖活性，同時，也可影響宮頸鱗癌細胞增殖周期，并能誘導宮頸鱗癌細胞的凋亡[6]。另有研究證實[7,8]， miRNA143及 miRNA145在膀胱癌中呈明顯低表達，提示，其可能與膀胱癌的發(fā)生關系密切，而且，miRNA143可抑制細胞的增殖和遷移[9

7、]。有研究表明[10]，在結直腸腫瘤組織中 miRNA143的表達水平，遠遠低于癌旁正常組。深入的研究發(fā)現(xiàn)[11]，miRNA143是DNMT基因重要調控因子，其通過對該基因的表達調控，最終影響DNA的甲基化水平。這些結果提示，miRNA143與多種腫瘤發(fā)生、發(fā)展關系密切。然而，其具體的作用機制，仍有待進一步深入的研究及探討。
　　生存素Survivin是凋亡抑制蛋白家族(inhibitor ofapoptosis protein

8、s，IAPs)中的一員。Survivin只在腫瘤以及胚胎組織中表達。研究發(fā)現(xiàn)Survivin具有腫瘤特異性，在腫瘤細胞的分化以及增殖方面、在腫瘤的浸潤以及轉移方面發(fā)揮著重要的作用。作為 IAPs最小的一員，Survivin具有其獨特的生物學功能以及組織分布。Survivin在抑制細胞凋亡及促進增殖、血管生成中，起著關鍵作用，并可通過多種機制，參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程。Survivin的表達，具有高度特異性。生理狀態(tài)下，大多數組織中幾乎檢

9、測不到其基因的表達，只有在胚胎組織中高表達，而在乳腺癌、食管癌、結直腸癌、肝細胞癌、卵巢癌、胰腺癌、黑色素瘤、甲狀腺癌、膀胱癌、肺癌等均有不同程度的表達[12-18]。有研究表明，在多種腫瘤中，miRNA143與survivin的表達關系密切。
　　目的
　　1.探討乳腺癌的X線斷層征象與Survivin表達的相關性，以期通過乳腺癌的 X線斷層征象，間接反映、推測癌組織中 Survivin的表達，為通過乳腺癌 X線斷層征象來

10、推測、評估腫瘤的生物學特性或反應以Survivin為靶點的治療是否有效奠定基礎。
　　2.在前面實驗研究基礎上，研究 miRNA143在人乳腺癌細胞系 FCY20210 T47D的生長、增殖以及凋亡的調控作用和可能的分子機理，及其在細胞中低表達與Survivin基因之間的關系。
　　材料與方法
　　1.對82例乳腺癌病人行乳腺X線斷層攝影，包括頭尾位及內外側斜位。檢查后二周內，所有的病例均行切除術，包括全乳或部分乳腺的

11、切除術。而術前，均不進行任何的抗腫瘤治療，如化療及放療。術后標本采用 westernblot法檢測腫瘤組織中survivin的表達。
　　2.合成microRNA143及其對照microRNA，采用脂質體轉染人乳腺癌細胞系FCY20210 T47D。采用MTT法檢測轉染microRNA143及其對照microRNA后人乳腺癌細胞系 FCY20210 T47D的增殖情況，采用流式細胞術和caspase-3活性檢測試劑盒檢測轉染人乳腺

12、癌細胞系 FCY20210 T47D的凋亡情況，采用western blot檢測轉染人乳腺癌細胞系 FCY20210 T47D的生存素Survivin的表達情況。采用 siRNA降低 survivin水平，再采用脂質體轉染人乳腺癌細胞系FCY20210 T47D，檢測細胞的凋亡情況。
　　3.使用SPSS22.0對本研究中所有的數據進行統(tǒng)計分析。結果都表示為平均值±標準差（X± SD）。采用t檢驗和單因素方差分析（one-way

13、ANOVA）對各組數據進行分析。P<0.05表示各組之間的差異具有顯著性。
　　結果
　　1.82例乳腺癌患者X線圖像，包括直接征象：單純腫塊30例（36.59%）、腫塊并鈣化28例（34.15%）、單純鈣化11例（13.41%）、局限致密6例（8.33%）及結構扭曲7例（8.54%）。按有無腫塊分組：腫塊組58例（70.73%），非腫塊組24例（29.27%）。按腫塊大?。ㄩL徑）：＜2cm組15例（占腫塊組的25.86%）

14、、2cm≤長徑≤5cm組24例（占腫塊組的41.38%）、＞5cm組19例（占腫塊組的32.76%）。按腫塊有無毛刺征：有毛刺組21例（占腫塊組的60.34%）、無毛刺組23例（占腫塊組的39.66%）。按有無鈣化：有鈣化組39例（占腫塊組的47.56%）、無鈣化組43例（占腫塊組的52.44%）。82例乳腺癌組織中結果顯示如下：①Survivin在單純腫塊（30例）、腫塊并鈣化（28例）、單純鈣化（11例）、局限致密（6例）及結構扭曲

15、（7例）各組間的表達強度無明顯相關。②Survivin在腫塊組（58例）與非腫塊組（24例）間的表達強度無明顯相關。③Survivin在長徑＜2cm組（15例）、2cm~5cm組（24例）及＞5cm組（19例）間的表達強度差異有統(tǒng)計學意義，且隨著腫塊長徑的增大，Survivin表達強度越高。④Survivin在有毛刺組（35例）與無毛刺組（23例）間的表達強度差異有統(tǒng)計學意義，有毛刺組Survivin的表達強度高于無毛刺組。⑤Survi

16、vin在有鈣化組（39例）與無鈣化組（43例）間的表達強度無明顯相關。
　　2.在microRNA143作用下，人乳腺癌細胞系 FCY20210 T47D中的survivin蛋白的表達水平明顯下降；當轉染microRNA143進人乳腺癌細胞系 FCY20210 T47D，再采用siRNA技術干擾survivin蛋白的水平，細胞的凋亡現(xiàn)象更加顯著。
　　結論
　　1.乳腺X線斷層攝影能較清晰的顯示乳腺癌的X線影像特征，是

17、乳腺癌較可靠的檢查方法。
　　2.Survivin的表達與乳腺癌X線斷層征象中的腫塊大小、有無毛刺相關，提示Survivin可能對乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤起促進作用。
　　3.乳腺癌 X線斷層征象與分子生物學相結合有可能提高乳腺癌的浸潤的評估的準確性。
　　4.乳腺癌X線斷層征象中腫塊大小及有無毛刺征，可能用于以Survivin為靶點的治療后的乳腺癌的評價。
　　5.microRNA143通過下調survivin