自擬菖蒲郁金湯對(duì)多發(fā)性抽動(dòng)癥模型大鼠單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及多巴胺系統(tǒng)的影響.pdf

1、目的:通過(guò)觀察自擬菖蒲郁金湯對(duì)多發(fā)性抽動(dòng)癥（TS）模型大鼠腦組織和血漿單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量及紋狀體多巴胺（DA）系統(tǒng)蛋白和mRNA的表達(dá)、神經(jīng)細(xì)胞的影響，分析自擬菖蒲郁金湯對(duì)TS模型大鼠單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及DA系統(tǒng)的作用機(jī)理，探討其治療TS的分子生物學(xué)機(jī)制，為臨床使用自擬菖蒲郁金湯治療TS提供理論基礎(chǔ)，并為臨床治療TS開拓新的治療思路。
　　方法:先將90只大鼠隨機(jī)分為空白組15只，造模組75只，造模組大鼠腹腔注射亞氨基二丙腈（IDPN

2、），劑量為350mg/（kg·d），空白組給予等體積生理鹽水腹腔注射，均為每天1次，持續(xù)7d。造模完第2天，造模組大鼠均出現(xiàn)不同程度的刻板行為及運(yùn)動(dòng)行為，評(píng)分均≥2分，表明造模成功。將造模組大鼠再次隨機(jī)分為模型組、泰必利組、自擬菖蒲郁金湯高、中、低劑量組，各15只。造模成功后開始給藥，泰必利組給予泰必利混懸液（3.194mg/ml），自擬菖蒲郁金湯高、中、低劑量組分別給予相應(yīng)濃度（5.152、2.576、1.288g生藥/ml）的自擬菖

3、蒲郁金湯藥液，均按15ml/（kg·d）灌胃；空白組和模型組給予等體積純凈水灌胃，每日1次，連續(xù)4W。造模完及每周灌胃完1小時(shí)后進(jìn)行運(yùn)動(dòng)行為及刻板行為觀察。灌胃給藥第28天后24小時(shí)采集標(biāo)本，用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測(cè)大鼠紋狀體多巴胺（DA）、高香草酸（HVA）、海馬去甲腎上腺素（NE）、腦干5-羥色胺（5-HT）及血漿DA、HVA、NE、5-HT的含量；蛋白免疫印跡（WB）法檢測(cè)紋狀體多巴胺受體D1（DRD1）、多巴胺受體D2

4、（DRD2）、兒茶酚胺氧位甲基轉(zhuǎn)移酶（COMT）、單胺氧化酶-B(MAO-B)、多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體（DAT）蛋白表達(dá)；實(shí)時(shí)定量多聚酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）法檢測(cè)紋狀體DRD1、DRD2、COMT、MAO-B mRNA表達(dá)；蘇木素-伊紅染色（HE）法觀察紋狀體神經(jīng)細(xì)胞變化及免疫組織化學(xué)染色(IHC)法檢測(cè)紋狀體DA、DAT蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　?。?）大鼠行為的變化
　?、俅笫筮\(yùn)動(dòng)行為的變化
　　造模后，模型組、泰必

5、利組、自擬菖蒲郁金湯高、中、低劑量組大鼠均出現(xiàn)不同程度的運(yùn)動(dòng)行為，但組間比較，運(yùn)動(dòng)行為評(píng)分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與模型組比較，治療2周后，泰必利組大鼠運(yùn)動(dòng)行為評(píng)分下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；治療3周后，泰必利組、自擬菖蒲郁金湯高劑量組大鼠運(yùn)動(dòng)行為評(píng)分下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.05）；治療4周后，泰必利組、自擬菖蒲郁金湯高劑量組大鼠運(yùn)動(dòng)行為評(píng)分下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.01）

6、。
　　②大鼠刻板行為的變化
　　造模后，模型組、泰必利組、自擬菖蒲郁金湯高、中、低劑量組大鼠均出現(xiàn)不同程度的刻板行為，但組間比較，刻板行為評(píng)分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與模型組比較，治療3周后，自擬菖蒲郁金湯高劑量組大鼠刻板行為評(píng)分下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；治療4周后，泰必利組、自擬菖蒲郁金湯高、中劑量組大鼠刻板行為評(píng)分下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01，P＜0.05）。
　　（

7、2）大鼠DA及HVA含量的變化
　　與空白組比較，模型組大鼠紋狀體DA含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，泰必利組和自擬菖蒲郁金湯高劑量組大鼠紋狀體DA含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.05）；與空白組比較，模型組大鼠紋狀體HVA含量的變化差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與模型組比較，自擬菖蒲郁金湯高劑量組大鼠紋狀體HVA含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　血漿DA含量各

8、組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與空白組比較，模型組大鼠血漿HVA含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，泰必利組和自擬菖蒲郁金湯高、中劑量組大鼠血漿HVA含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05， P＜0.01，P＜0.05）。
　?。?）大鼠NE和5-HT含量的變化
　　海馬NE含量各組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與空白組比較，模型組大鼠腦干5-HT含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

9、P＜0.01）；與模型組比較，自擬菖蒲郁金湯高劑量組大鼠腦干5-HT含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　血漿NE含量各組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與空白組比較，模型組大鼠血漿5-HT含量的變化差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與模型組比較，自擬菖蒲郁金湯高、中、低劑量組大鼠血漿5-HT含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.01， P＜0.01）。
　　（4）大鼠紋狀體DRD1、DRD

10、2蛋白和mRNA表達(dá)的變化
　　與空白組比較，模型組大鼠紋狀體DRD1蛋白表達(dá)增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，泰必利組和自擬菖蒲郁金湯各劑量組大鼠紋狀體DRD1蛋白表達(dá)的變化差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；紋狀體DRD2蛋白表達(dá)各組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　與空白組比較，模型組大鼠紋狀體DRD1 mRNA表達(dá)增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，泰必利組及自擬菖蒲

11、郁金湯各劑量組大鼠紋狀體DRD1 mRNA表達(dá)的變化差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；紋狀體DRD2 mRNA表達(dá)各組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　?。?）大鼠紋狀體COMT、MAO-B蛋白和mRNA表達(dá)的變化
　　大鼠紋狀體COMT、MAO-B蛋白表達(dá)各組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　大鼠紋狀體COMT、MAO-B mRNA表達(dá)各組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　

12、　（6）大鼠紋狀體DAT蛋白表達(dá)的變化
　　與空白組比較，模型組大鼠紋狀體DAT蛋白表達(dá)減弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，泰必利組和自擬菖蒲郁金湯高劑量組大鼠紋狀體DAT蛋白表達(dá)增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.05）。
　?。?）大鼠紋狀體神經(jīng)細(xì)胞的變化
　　造模后，模型組大鼠紋狀體神經(jīng)細(xì)胞（以神經(jīng)元細(xì)胞為主）萎縮；治療后，泰必利組大鼠紋狀體神經(jīng)細(xì)胞無(wú)明顯變化；自擬菖蒲郁金湯各劑量組大

13、鼠紋狀體神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量有所增加，體積有所增大，且以高劑量組為最顯著。
　?。?）大鼠紋狀體DA、DAT免疫染色強(qiáng)度的變化
　　與空白組比較，模型組大鼠紋狀體DA和DAT蛋白表達(dá)平均光密度降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.05）；與模型組比較，泰必利組DA和DAT蛋白表達(dá)平均光密度升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.05）；自擬菖蒲郁金湯高劑量組DA和DAT蛋白表達(dá)平均光密度升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0

14、.05，P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　?。?）自擬菖蒲郁金湯具有抗抽動(dòng)的作用，其療效與劑量相關(guān)，且其抗抽動(dòng)作用優(yōu)于泰必利。
　?。?）單胺類神經(jīng)遞質(zhì)間的平衡失調(diào)可能與TS發(fā)病相關(guān)，自擬菖蒲郁金湯可能通過(guò)調(diào)節(jié)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)間的平衡而達(dá)到抗抽動(dòng)的作用。
　?。?）在TS的發(fā)病過(guò)程中，DA系統(tǒng)功能的亢進(jìn)可能與DR超敏感相關(guān)，而自擬菖蒲郁金湯可能通過(guò)降低DR的敏感性，從而達(dá)到拮抗DA系統(tǒng)功能亢進(jìn)的作用，最終起到抗抽動(dòng)的