嗜熱光全綠絲菌Chloroflexus aurantiacus.pdf

1、3-羥基丙酸固碳途徑是近年才確定的新型C02固定途徑,存在于以嗜熱光合綠曲菌（Chloroflexusaurantiacus,Caurantiacus,CFX）為代表的一類細菌中。該途徑以3-羥基丙酸(3-hydroxypropionate,3-HP)作為其特征代謝中間產(chǎn)物,故名3-HP具有極高的經(jīng)濟價值,是生產(chǎn)多種有機化合物和聚酯類的原料。然而目前生產(chǎn)3-HP的方法不管是傳統(tǒng)的化工法,抑或是基因工程的方法,具有成本高、效率低下或是副產(chǎn)

2、品多等劣勢。本研究的目的是通過對3-HP固碳途徑的研究,尋找一種低投入高產(chǎn)出的生產(chǎn)3-HP的方法。
　　 (1)本研究對CFX的生長條件進行探索。當全日光照和45℃的環(huán)境溫度下,生長于PE培養(yǎng)基中的CFX經(jīng)過14天左右就完成了一個生長周期。在PE培養(yǎng)基中加入丙酸鈉,則可使生長周期縮短到10天以內。
　　 (2)利用各種蛋白質分離方法,從CFX細胞中提取出總蛋白、可溶性蛋白和膜蛋白組分,根據(jù)3-HP固碳途徑中關鍵酶的亞基含

3、有生物素這一特性,利用蛋白質電泳和蛋白質免疫印記（WesternBlot,WB）確定了目標條帶為20kD左右大小。根據(jù)CFX基因組信息,經(jīng)過篩選比對,確定該蛋白可能為丙酰輔酶A羧化酶(Propionyl-CoA Carboxylase,PCC)的生物素羧基載體蛋白(Biotin Carboxyl Carrier Protein,BCCP)。
　　 (3)利用基因工程的方法,克隆CFX中PCC-BCCP的基因,連接到pPAL-7質