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文檔簡(jiǎn)介
1、腦梗死造成的神經(jīng)功能損害對(duì)人類(lèi)的健康有著嚴(yán)重的影響,使患者出現(xiàn)殘疾的幾率已位居第一,病死率位居第三,僅低于癌癥和心肌梗死。據(jù)世界衛(wèi)生組織預(yù)計(jì)在每年大約有1500萬(wàn)患有腦血管相關(guān)疾病,缺血性腦血管病是其發(fā)病率的4/5。腦梗死的患病已經(jīng)逐漸年輕化,其復(fù)發(fā)、致殘和死亡的機(jī)率均較高,不但使患者的生活質(zhì)量下降,也給家庭和社會(huì)造成了沉重的負(fù)擔(dān),給我國(guó)醫(yī)療衛(wèi)生產(chǎn)生了巨大壓力。腦部血流減少后,腦組織會(huì)產(chǎn)生一系列炎性級(jí)聯(lián)效應(yīng),包括炎癥因子的表達(dá)、氨基酸毒
2、性的興奮、神經(jīng)元細(xì)胞死亡、周?chē)O化四個(gè)不同的機(jī)制,且各機(jī)制在發(fā)生時(shí)間上可相互影響、互成因果。其中炎癥反應(yīng)是損傷級(jí)聯(lián)反應(yīng)發(fā)生過(guò)程中氧自由基、細(xì)胞因子及促炎酶共同促發(fā)的結(jié)果。細(xì)胞因子既可通過(guò)作用于內(nèi)皮細(xì)胞,將受體激活,從而使白細(xì)胞進(jìn)入腦內(nèi),又可以直接刺激小膠質(zhì)或星形膠質(zhì)細(xì)胞釋放有害成分,最終形成腦損傷。病與證結(jié)合既體現(xiàn)了中醫(yī)的基本理論,又結(jié)合了西醫(yī)學(xué)理論與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)學(xué)的知識(shí),運(yùn)用西醫(yī)學(xué)的病因理論制備了動(dòng)物的疾病,同時(shí)將中醫(yī)的證候建立在疾病的
3、模型中,使動(dòng)物模型中的證候與疾病相融合,使其具有較好的穩(wěn)定性和可靠性,并且可以動(dòng)態(tài)的分階段的、系統(tǒng)的進(jìn)行觀察與研究,因此病證結(jié)合動(dòng)物模型的研究已成為現(xiàn)代中醫(yī)藥研究模式的一個(gè)重要發(fā)展趨勢(shì),對(duì)腦梗死的疾病發(fā)病機(jī)制及用藥探索有著重大的實(shí)際應(yīng)用意義。
目的:
1.通過(guò)檢測(cè)痰熱腑實(shí)腦缺血再灌注模型大鼠血脂血糖等指標(biāo),明確腦缺血痰熱腑實(shí)模型應(yīng)激性代謝功能的變化,觀察扎里奴思方對(duì)腦梗死代謝功能紊亂的調(diào)節(jié)作用。
2.通過(guò)觀
4、察腦缺血再灌注后痰熱腑實(shí)型大鼠神經(jīng)功能和神經(jīng)元細(xì)胞的病理變化,明確扎里奴思方對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用。
3.通過(guò)觀察腦缺血再灌注痰熱腑實(shí)型模型大鼠經(jīng)再灌注后炎性相關(guān)因子表達(dá)的情況,從扎里奴思方對(duì)其變化的影響,明確其可能的作用機(jī)制;
方法:
Sprague Dawley大鼠,雄性,250只,SPF級(jí),將其隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組、單純腦梗死組、痰熱腑實(shí)組、尼莫地平組、扎里奴思方組共六個(gè)組,其中正常組10只,其余各
5、組分為1天、3天、7天3個(gè)取材時(shí)間點(diǎn)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)15只大鼠;正常組、假手術(shù)組、單純腦梗死組給予生理鹽水灌胃,其余各組大鼠通過(guò)藥物灌胃制備痰熱腑實(shí)證候模型,痰熱腑實(shí)模型完成后行大腦中動(dòng)脈阻塞(MCAO)手術(shù),術(shù)后2小時(shí)進(jìn)行缺血再灌注;對(duì)模型大鼠的宏觀表現(xiàn)進(jìn)行觀察,對(duì)大鼠的神經(jīng)功能采用Longa5級(jí)4分法進(jìn)行評(píng)分,大鼠腦組織神經(jīng)元細(xì)胞采用蘇木精-伊紅(Hematoxylin and Eeosin staining-HE)染色法觀察;檢測(cè)模型大
6、鼠總膽固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、血糖(glucose,GLU)、低密度脂蛋白(low- densitylipoprotein,LDL)等能量代謝指標(biāo)的變化;運(yùn)用免疫組化測(cè)定各取材點(diǎn)缺血側(cè)腦組織中TNF-α、白介素6、VCAM-1、ICAM-1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),實(shí)時(shí)熒光定量(Real-time PCR,RT-PCR)法測(cè)定各因子mRNA的表達(dá),探討扎里奴思方對(duì)痰熱腑實(shí)腦缺血模型
7、大鼠炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)及能量代謝的影響及其神經(jīng)保護(hù)機(jī)制。
結(jié)果:
1.痰熱腑實(shí)模型大鼠在腦缺血再灌注后血脂及血糖等指標(biāo)的變化及扎里奴思方對(duì)其的影響
相比正常組,單純腦梗死組大鼠甘油三酯、血糖均有顯著的增高(P<0.05);痰熱腑實(shí)模型組大鼠血糖較假手術(shù)組和單純腦梗死組升高(P<0.05);總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白相比假手術(shù)組明顯上升(P<0.05);與痰熱腑實(shí)1天組比較,尼平組TC、TG、LDL-C顯著降
8、低(P<0.05);痰熱腑實(shí)3天組比較尼莫地平3天組TC、TG、LDL-C差異顯著(P<0.05);扎方組1天、3天、7天組與痰熱腑實(shí)組相比TC、TG、LDL-C均有顯著降低(P<0.05);HDL-C有明顯的升高(P<0.05);GLU在尼平組和扎方組3天、7天時(shí)顯著減少(P<0.05)。
2.痰熱腑實(shí)腦缺血模型大鼠再灌注后神經(jīng)細(xì)胞損傷及扎里奴思方的保護(hù)作用
假手術(shù)組大鼠未出現(xiàn)評(píng)分升高的表現(xiàn),經(jīng)過(guò)MCAO手術(shù)后的大
9、鼠較假手術(shù)組和正常組相比,神經(jīng)功能評(píng)分明顯升高;單純腦梗死組及痰熱腑實(shí)組大鼠與假手術(shù)組相比,1天、3天、7天的神經(jīng)功能評(píng)分均明顯升高(P<0.01),尤以1天組大鼠上升最為明顯,且痰熱腑實(shí)模型組神經(jīng)功能缺損較單純腦梗死組明顯;給藥后,扎里奴思方組和尼莫地平組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)功能評(píng)分均開(kāi)始降低,并隨給藥時(shí)間延長(zhǎng),評(píng)分下降明顯(P<0.05);尼莫地平組神經(jīng)功能評(píng)分較扎里奴思方組略高。
3.痰熱腑實(shí)模型大鼠腦缺血再灌注后腦組織神
10、經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)的改變及扎里奴思方對(duì)其的影響
扎里奴思方對(duì)痰熱腑實(shí)腦缺血再灌注大鼠缺血側(cè)腦細(xì)胞的影響:HE染色結(jié)果顯示,與單純腦梗死組相比,假手術(shù)組海馬組織結(jié)構(gòu)排列整齊,胞體、核仁清晰,染色均勻,神經(jīng)元細(xì)胞排列緊密;模型組海馬組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)松散,排列散亂,神經(jīng)元細(xì)胞消失較多,部分神經(jīng)細(xì)胞胞核變小,細(xì)胞間質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)大小不等的空泡,細(xì)胞核深染且核仁消失,皺縮,界限不清,大部分有退形性改變,神經(jīng)細(xì)胞有嗜酸性改變;扎方組和尼平組神經(jīng)細(xì)胞排列稍
11、亂,仍可見(jiàn)細(xì)胞固縮,其周邊可見(jiàn)神經(jīng)細(xì)胞輕度腫脹,胞漿、胞膜、胞核尚能分清,程度較模型組明顯減輕,扎方組較尼莫地平組改善明顯。
4.痰熱腑實(shí)模型大鼠腦缺血再灌注后炎癥因子的表達(dá)及扎里奴思方對(duì)其的影響
4.1.扎里奴思方對(duì)TNF-α表達(dá)的影響
TNF-α在假手術(shù)組中表達(dá)較少,單純腦梗死組與假手術(shù)組相比陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增多明顯(P<0.01);隨著時(shí)間的延長(zhǎng),TNF-α陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)呈下降趨勢(shì),與假手術(shù)組相比仍較高;尼平組
12、與扎方組相對(duì)痰熱腑實(shí)組來(lái)說(shuō),TNF-α陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)都有所下降(P<0.01),以扎里奴思方1d,3d時(shí)下降更為明顯(P<0.05);模型組各時(shí)間點(diǎn)比假手術(shù)組TNF-αmRNA表達(dá)升高顯著(P<0.01);尼平組和扎方組相比模型組TNF-α mRNA表達(dá)降低明顯(P<0.01);扎里奴思方組較尼莫地平各組TNF-α mRNA表達(dá)有所降低,其中扎里奴思方1、7天降低明顯(P<0.05)。
4.2.扎里奴思方對(duì)IL-6β表達(dá)的影響
13、r> 單純腦梗死組IL-6陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比假手術(shù)組增多明顯(P<0.05);扎里奴思方組各時(shí)間點(diǎn)與單純腦梗死組及痰熱腑實(shí)組比較差異亦均有顯著性(P<0.05);與尼平組比較扎方組在1天、3天時(shí)均具有顯著差異(P<0.05);在假手術(shù)組中IL-6 mRNA表達(dá)較低,模型組各時(shí)間點(diǎn)相比假手術(shù)組,IL-6 mRNA表達(dá)顯著升高(P<0.01),在3天時(shí)達(dá)到高峰;尼莫地平組和扎里奴思方組相比模型各組,IL-6 mRNA表達(dá)明顯降低(P<0.01)
14、;扎方各組相比尼平1天、3天、7天組,IL-6 mRNA表達(dá)降低明顯(P<0.05)。
4.3.扎里奴思方對(duì)ICAM-1表達(dá)的影響
假手術(shù)組中ICAM-1陽(yáng)性細(xì)胞較少表達(dá),單純腦梗死組相比,假手術(shù)組大鼠缺血側(cè)腦組織中陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)升高明顯(P<0.01);在術(shù)后1天表達(dá)最多,扎方組與尼平組大鼠缺血側(cè)腦組織中陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)減少且與模型組各組相比差異明顯(P<0.01);扎方組相比尼平組,在1天、3天時(shí)減少明顯;腦缺血后1天
15、、3天、7天,模型組ICAM-1 mRNA的表達(dá)明顯升高,3天后開(kāi)始減少(P<0.01);痰熱腑實(shí)組在7天時(shí)較單純腦梗死組表達(dá)稍有增多;扎方各組和尼平各組與非給藥組比較,ICAM-1 mRNA的表達(dá)都明顯降低,(P<0.01,P<0.05);扎方各組與尼平1天、3天、7天組比較ICAM-1 mRNA表達(dá)降低明顯(P<0.05)。
4.4.扎里奴思方對(duì)VCAM-1表達(dá)的影響
假手術(shù)組中VCAM-1陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)較少,單純
16、腦梗死組與假手術(shù)組相比,各時(shí)間點(diǎn)VCAM-1細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)明顯增多(P<0.05);扎方組和尼莫地平組各時(shí)間點(diǎn)VCAM-1細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)明顯減少(P<0.05);扎里奴思方與尼莫地平組相比,1天組VCAM-1細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)降低尤其顯著(P<0.05);VCAM-1 mRNA在假手術(shù)組中已有少量表達(dá),模型組各時(shí)間點(diǎn)假手術(shù)組相比,VCAM-1 mRNA顯著升高(P<0.01);相比非用藥組,扎方組和尼平組VCAM-1 mRNA表達(dá)明顯降低(P<0
17、.01,P<0.05);扎方各組相比尼平1天、3天、7天組VCAM-1 mRNA表達(dá)明顯降低(P<0.05)。
結(jié)論:
1.痰熱腑實(shí)模型大鼠在腦缺血再灌注反應(yīng)后應(yīng)激性出現(xiàn)血糖、TG、膽固醇、LDL的升高,HDL的降低,應(yīng)用扎里奴思方后大鼠血糖及血脂水平均有不同程度的改善,說(shuō)明其對(duì)梗死后脂質(zhì)的代謝有促進(jìn)作用。
2.痰熱腑實(shí)模型大鼠在腦缺血損傷后神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的損傷并表現(xiàn)出神經(jīng)功能缺失癥狀,扎里奴思方可促
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