學(xué)習(xí)經(jīng)歷對川硬皮腫腿蜂氣味結(jié)合蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、SichuanA嘶culturalUniVers時MasterDegreeDissertationLeammgexperienceinnuencetheexpressionoftheodorantbilldingproteinin&ZP加沈r，，2口臟辦甜口刀P刀s括XiaoByChenchunyanDirectedbyPro￡Y抽gWeiMajorofForestProtectionCollegeofFores蚵SichuanAgri

2、culturalUhiVersit)，Chengdu，61l130，Sichuan，PR。ChinaJune，2015摘要川硬皮腫腿蜂(&比m沈rm口5fc辦“口胛P淞括xiao)，屬腫腿蜂科(Bethylidae)天牛腫腿蜂屬(＆彪m如r肌口)，是一種能寄生多種鉆蛀性害蟲的天敵昆蟲，具有重要的生物防治價值。昆蟲通過感知空氣中的揮發(fā)性氣味物質(zhì)指導(dǎo)其行為反應(yīng)，這包括兩個重要方面：一是寄主植物揮發(fā)出的多種氣味物質(zhì)組成的化學(xué)圖譜，二是昆蟲具有

3、與之相適應(yīng)的結(jié)構(gòu)和識別機(jī)制，只有對這兩方面都進(jìn)行了深入研究，才能更好地應(yīng)用到害蟲防治的實踐中。近年來，國內(nèi)對昆蟲感受氣味物質(zhì)的行為化學(xué)模式的研究較多，但是昆蟲氣昧結(jié)合蛋白及其與氣味識別的關(guān)系研究較少，對寄生蜂的相關(guān)研究則更少。因此，我們利用Y型行為儀測試不同日齡的川硬皮腫腿蜂經(jīng)云斑天牛蟲糞木屑混合物處理后的行為反應(yīng)，研究川硬皮腫腿蜂對云斑天牛蟲糞木屑揮發(fā)性氣味的學(xué)習(xí)效應(yīng)；根據(jù)己報道的管氏腫腿蜂(＆膪，D如M螂倒口歷Xiaoetwu)氣味

4、結(jié)合蛋白的cDNA序列設(shè)計引物，利用R1’PCR法獲得編碼川硬皮腫腿蜂兩種氣味結(jié)合蛋白的cDNA片段，并對其進(jìn)行基因克??；利用sYBRGreenI熒光染料法，采用Real—1hePCR比較Ct值的相對定量法獲得川硬皮腫腿蜂不同部位、不同日齡經(jīng)歷及未經(jīng)歷云斑天牛蟲糞木屑的氣味結(jié)合蛋白基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)譜，研究其基因表達(dá)規(guī)律，初步探索川硬皮腫腿蜂學(xué)習(xí)效應(yīng)對氣味結(jié)合蛋白表達(dá)的影響，主要研究結(jié)果如下：1不同日齡川硬皮腫腿蜂對云斑天牛蟲糞木屑混合物的

5、學(xué)習(xí)效應(yīng)經(jīng)歷云斑天牛蟲糞木屑混合物氣味處理后的腫腿蜂與未經(jīng)歷氣味處理的腫腿蜂相比，前者對該氣味的選擇率均得到提高。川硬皮腫腿蜂在羽化和成蟲初期(1、2日齡)對云斑天牛蟲糞木屑混合物氣味學(xué)習(xí)效應(yīng)逐漸增強，在羽化后第2目學(xué)習(xí)效應(yīng)最強，而在羽化后第4~10日學(xué)習(xí)效應(yīng)減弱，在羽化后第12日學(xué)習(xí)效應(yīng)又顯著增強。2川硬皮腫腿蜂OBP基因克隆及序列分析根據(jù)已經(jīng)報道的管氏腫腿蜂SguaOBPl和SguaOBP2基因設(shè)計引物，克隆分析了編碼川硬皮腫腿峰氣

6、味結(jié)合蛋白Ssic0BPl和Ssic—OBP2的cDNA(GenBank序列號分別為：KM924438和KM924439)。根據(jù)測序結(jié)果和結(jié)構(gòu)分析表明，川硬皮腫腿SsicOBPl基因包含1個長為401bp的開放閱讀框，編碼133個氨基酸殘基；ssicOBP2基因包含1個長為420bp的開放閱讀框，編碼139個氨基酸殘基。ssic一0BPl與SsicOBP2蛋白均成酸性，前者分子量約為14，4kD，后者分子量約為157kD，均含有6個保守