幾種新型稀土熒光探針的合成、性質(zhì)及其熒光分析.pdf

1、熒光分析法廣泛應(yīng)用于生物科學(xué)、醫(yī)學(xué)診斷、環(huán)境監(jiān)測(cè)等眾多領(lǐng)域。尤其在生物分析方面,熒光分析靈敏度高,對(duì)樣品傷害小,在蛋白質(zhì)、核酸、細(xì)胞檢測(cè)及免疫分析等方面發(fā)揮了重要作用。由于大多數(shù)生物分子本身無熒光或熒光較弱,人們用熒光標(biāo)記的探針來檢測(cè)、示蹤生物分子。熒光稀土配合物與有機(jī)熒光染料、量子點(diǎn)、熒光蛋白等主要的熒光標(biāo)記物相比,具有熒光穩(wěn)定性好、熒光壽命長(zhǎng)、發(fā)射峰窄、Stokes位移大等優(yōu)點(diǎn),通過時(shí)間分辨熒光分析,有效消除背景熒光干擾,獲得超高靈

2、敏度。因此,各種新的熒光稀土配合物探針的合成及其生物分析一直是生物分析領(lǐng)域中研究的熱點(diǎn)。
　　 我們制備了新型的大分子稀土熒光探針,它是一種以高分子聚合物為骨架,連接多個(gè)稀土熒光分子的熒光探針,大大提高了探針的熒光強(qiáng)度。這一類型的稀土熒光探針還未見報(bào)道。常見的稀土配合物,只能產(chǎn)生一種顏色的熒光。我們以不同比例Eu與Tb混合摻雜,制備了多色的熒光SiO2納米粒子,這種多色熒光標(biāo)記探針有望用于多色熒光成像,及多組分時(shí)間分辨熒光分析等

3、方面。主要研究?jī)?nèi)容如下:
　　 1.高分子聚乙烯亞胺作為骨架,用碳二亞胺交聯(lián)劑,將具有高發(fā)光強(qiáng)度的稀土熒光配體DTPA-cs124連接其上,經(jīng)分離純化后檢測(cè)其熒光性質(zhì)。結(jié)果表明產(chǎn)物與Tb的配合物的熒光強(qiáng)度是Tb與單個(gè)配體DTPA-cs124配合物的6倍。這樣的高分子熒光標(biāo)記物,具有大Stokes位移、長(zhǎng)熒光壽命的優(yōu)點(diǎn),能用于時(shí)間分辨熒光分析,分子上的氨基官能團(tuán)為進(jìn)一步的化學(xué)修飾提供了位點(diǎn)。
　　 2.用反相微乳液法制備了

4、摻雜幾種稀土配合物分子的SiO2納米粒子,結(jié)果顯示所制備的納米粒子尺寸均一,外形規(guī)則球形,能發(fā)射強(qiáng)熒光。不同比例的Tb稀土配合物及Eu稀土配合物同時(shí)摻雜到SiO2納米粒子中,得到幾種不同顏色的熒光納米粒子。
　　 3.研究了高分子修飾的熒光稀土分子制備SiO2納米粒子的熒光穩(wěn)定性。我們以熒光稀土小分子、聚乙烯亞胺修飾的熒光稀土分子和硅烷化試劑修飾的熒光稀土分子為內(nèi)核,采用反相微乳液法制備了三種SiO2包裹的稀土納米粒子,考察了它

5、們?cè)谒芤褐械臒晒鈴?qiáng)度穩(wěn)定性。結(jié)果表明,以修飾過聚乙烯亞胺和硅烷化試劑的熒光稀土分子制備的納米粒子,在水溶液中的熒光穩(wěn)定性得到了顯著提高。
　　 4.我們以磁珠為固定相,采用三明治夾心法雜交,用三種限制性內(nèi)切酶EcoRⅠ、BamHⅠ、HindⅢ進(jìn)行酶切,通過分析檢測(cè)酶切后洗脫液的熒光強(qiáng)度,得到了這三種酶的酶切反應(yīng)效率。同時(shí)我們將三對(duì)分別帶有這三種酶的酶切位點(diǎn)的DNA雜交結(jié)合到磁珠上,分別按三種順序使用三種酶進(jìn)行酶切反應(yīng),結(jié)果表明