DRC3f對實(shí)驗(yàn)性大鼠非酒精性脂肪肝保護(hù)作用的脂肪代謝機(jī)制研究.pdf

1、目的：非酒精性脂肪肝（NAFLD）是一類除外酒精和其他明確損肝因素導(dǎo)致的以肝細(xì)胞內(nèi)脂肪蓄積為主要特點(diǎn)的臨床病理綜合征。隨著人民生活水平的提高，我國 NAFLD患病率正在逐年上升。目前研究認(rèn)為， NAFLD是由多種因素平行作用導(dǎo)致，飲食習(xí)慣、遺傳因素和環(huán)境因素可共同影響脂肪代謝，少數(shù)患者可因肝細(xì)胞炎癥而進(jìn)展為肝纖維化、肝硬化、肝細(xì)胞肝癌。本研究室前期采用飛行質(zhì)譜技術(shù)（MALDI-TOF MS）在慢性乙型肝炎患者血清中檢測到一種含有16個(gè)氨

2、基酸的差異性多肽片段：脫精氨酸補(bǔ)體C3f（DRC3f），該多肽在輕度和中度的病人血清中表達(dá)高于重度病人。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn) DRC3f具有抑制肝細(xì)胞增殖的作用，其對免疫性肝損傷、肝纖維化均有保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)室前期關(guān)于DRC3f對非酒精性脂肪肝保護(hù)性作用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn) DRC3f可減少高脂飲食聯(lián)合四氯化碳導(dǎo)致的大鼠肝臟空泡樣變，改善血清學(xué)指標(biāo)，但是 DRC3f發(fā)揮保護(hù)作用的具體分子機(jī)制尚不完全明確。本研究通過 AMPK通路、PPAR/LXR通

3、路和PI3K/Akt通路從脂肪代謝機(jī)制的角度來探索DRC3f對非酒精性脂肪肝的保護(hù)作用，為非酒精性脂肪肝的治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：本研究選擇前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中血清學(xué)指標(biāo)和肝組織切片病理學(xué)指標(biāo)均較好的DRC3f200μg/kg組（DRC3f組）以及正常對照組（正常組）、高脂飲食聯(lián)合四氯化碳誘導(dǎo)大鼠NAFLD模型組（模型組）、復(fù)方甘草酸苷陽性對照組（灌胃給予復(fù)方甘草酸苷，復(fù)方甘草酸苷組）、降脂通絡(luò)軟膠囊陽性對照組（灌胃給予降脂通絡(luò)軟

4、膠囊，降脂通絡(luò)軟膠囊組）的留存肝組織樣本作為研究對象。
　　1.應(yīng)用qRT-PCR方法測定凍存大鼠肝組織中的AMPK信號通路相關(guān)指標(biāo)：adiponectin、LKB1、AMPKα1、AMPKα2、ACC、CPT1、SREBP-1c、PNPLA3、FAS；PPAR和LXR脂代謝相關(guān)通路的指標(biāo)：PPARα、LXRα、PPARγ；炎癥、纖維化和細(xì)胞增殖相關(guān)因子：IL-6、TGF-β1、collagen1、PCNA的基因表達(dá)水平。

5、　　2.應(yīng)用western-blot方法測定正常組、模型組、DRC3f組、復(fù)方甘草酸苷組、降脂通絡(luò)軟膠囊組肝組織的p-AMPKα/AMPKα、PI3K、p-Akt/Akt蛋白相對表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.AMPK信號通路的相關(guān)基因及蛋白表達(dá)水平
　　模型組AMPKα1、AMPKα2 mRNA相對表達(dá)量與正常組相比均降低（P<0.001），DRC3f組、復(fù)方甘草酸苷組、降脂通絡(luò)軟膠囊組與模型組比，AMPKα1、AM

6、PKα2 mRNA相對表達(dá)量均升高（P<0.01），且DRC3f組AMPKa1和AMPKα2 mRNA表達(dá)量高于復(fù)方甘草酸苷組和降脂通絡(luò)軟膠囊組（P<0.001）。與正常組比，模型組p-AMPKα/AMPKα蛋白相對表達(dá)量降低（P<0.01），DRC3f組與模型組比p-AMPKα/AMPKα蛋白相對表達(dá)量升高（P<0.05）。
　　模型組 adiponectin、LKB1 mRNA相對表達(dá)量與正常組相比均降低（P<0.05）。與模

7、型組相比，DRC3f組adiponectin、LKB1mRNA相對表達(dá)量均升高（P<0.01），且DRC3f組adiponectin、LKB1mRNA表達(dá)量均高于復(fù)方甘草酸苷組和降脂通絡(luò)軟膠囊組（P<0.05）。
　　模型組 CPT1 mRNA相對表達(dá)與正常組相比降低（P<0.05），ACC mRNA相對表達(dá)升高（P<0.001）。與模型組相比，DRC3f組、復(fù)方甘草酸苷組、降脂通絡(luò)軟膠囊組 ACC mRNA相對表達(dá)量降低（P<0

8、.001）， CPT1 mRNA相對表達(dá)量升高（P<0.01）。
　　模型組SREBP-1c、PNPLA3、FAS mRNA相對表達(dá)量與正常組相比均升高（P<0.001）。與模型組比，DRC3f組、復(fù)方甘草酸苷組、降脂通絡(luò)軟膠囊組SREBP-1c、PNPLA3、FAS mRNA相對表達(dá)量均降低（P<0.01），但是 DRC3f組 SREBP-1c mRNA表達(dá)水平高于降脂通絡(luò)軟膠囊組（P<0.001），而PNPLA3、FAS mR

9、NA與降脂通絡(luò)軟膠囊組和復(fù)方甘草酸苷組之間無顯著性差別。
　　2.PPARα、LXRα、PPARγ的基因表達(dá)水平
　　各組之間PPARα與LXRαmRNA相對表達(dá)量均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。模型組與正常組比，PPARγmRNA相對表達(dá)量升高（P<0.001）；降脂通絡(luò)軟膠囊組與模型組比PPARγmRNA相對表達(dá)量降低（P<0.05），但是DRC3f組與模型組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.118）。
　　3.胰島素相關(guān)PI3K、p-A

10、kt/Akt的蛋白表達(dá)水平
　　Western blot結(jié)果顯示，正常組、模型組、DRC3f組、復(fù)方甘草酸苷組、降脂通絡(luò)軟膠囊組PI3K和p-Akt/Akt的蛋白相對表達(dá)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　4.炎癥、纖維化和細(xì)胞增殖相關(guān)因子IL-6、TGF-β1、collagen1、PCNA的表達(dá)水平
　　模型組IL-6、TGF-β1、collagen1 mRNA相對表達(dá)量與正常組相比均升高（P<0.001）。與模型組相比，DRC3

11、f組、復(fù)方甘草酸苷組、降脂通絡(luò)軟膠囊組IL-6、TGF-β1 mRNA相對表達(dá)量均降低（P<0.05）；DRC3f組、復(fù)方甘草酸苷組、降脂通絡(luò)軟膠囊組collagen1 mRNA相對表達(dá)水平降低（P<0.05），且DRC3f組collagen1 mRNA相對表達(dá)量低于復(fù)方甘草酸苷組和降脂通絡(luò)軟膠囊組（P<0.01）。各組之間PCNA mRNA相對表達(dá)量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　1.DRC3f對高脂飲食聯(lián)合四氯化碳誘導(dǎo)的