不同時機艾灸對寒濕凝滯型痛經大鼠子宮組織微血管密度及血管活性物質含量的影響.pdf

1、目的：觀察不同時機艾灸干預對寒濕凝滯型原發(fā)性痛經（PD）大鼠行為學、子宮組織微血管密度（MVD）、子宮組織前列腺素F2α（PGF2α）、前列腺素E2（PGE2）、加壓素（AVP）、一氧化氮（NO）、內皮素（ET-1）含量以及血漿血栓素B2（TXB2）、6-酮-前列腺素F1α（6-keto-PGF1α）含量的影響，以探討其對寒濕凝滯型原發(fā)性痛經模型大鼠止痛效應影響的差異性及其可能的作用機制。以期為臨床選擇最佳時機的艾灸介入治療寒濕凝滯型原

2、發(fā)性痛經提供可靠的實驗依據。
　　方法：將60只Wistar雌性大鼠適應性喂養(yǎng)7 d后，采用陰道涂片法，篩選出處于動情間期大鼠45只，并將其隨機分為對照組（Control）、模型組（Model）、預先灸組（Pre-Mox）、即刻灸組（Im-Mox）和預先即刻灸組（P&I-Mox）（每組9只）。對照組于大鼠股部給予皮下注射生理鹽水，1次/d，連續(xù)10 d（第1 d、10 d注射0.5 mL/只，第2~9 d0.2 mL/只）。其余4

3、組大鼠均采用（0±1）℃冰水浴結合苯甲酸雌二醇注射法制備寒濕凝滯型痛經模型，將大鼠后肢及下腹部浸入（0±1）℃冰水混合物中（室溫23±2℃）進行寒冷刺激，1次/d，20 min/次，同時給予大鼠股部皮下注射苯甲酸雌二醇，1次/d，連續(xù)10 d（第1 d、10 d注射0.5 mg/只，第2~9 d0.2 mg/只）。預先灸組于造模期間第8 d開始治療，第10 d結束治療，共3 d；即刻灸組于造模第11 d注射完縮宮素后（即痛經模型復制成功

4、后）開始治療，共1d；預先即刻灸組于造模期間第8d開始治療，第11 d結束治療，共4 d。3個艾灸組均采用直徑為7 mm粗細的艾條，于神闕、關元穴處同時施溫和灸，10 min/穴，1次/d。對照組、模型組均采用與艾灸組相同的體位固定，10 min/次，1次/d。除對照組外，其余4組寒濕凝滯型PD模型大鼠模型均注射縮宮素后觀察其行為學反應，待行為學檢測結束后，將大鼠斷頭取血后，于冰盤上迅速分離出“Y”字形子宮左側子宮組織，以冷藏的生理鹽水

5、洗凈拭干稱重，加入生理鹽水碾磨，制成30％的子宮組織勻漿，于低溫4℃時3000 rpm離心15 min，取上清液，用放射免疫分析法檢測大鼠子宮組織PGE2、AVP、ET-1含量，酶聯免疫法檢測大鼠子宮組織PGF2α含量，生物化學技術檢測大鼠子宮組織NO含量。右側子宮組織用濃度為4%的多聚甲醛溶液進行固定，石蠟包埋、切片，一部分采用免疫組化法檢測子宮組織MVD，剩余部分用于HE染色，于光鏡下觀察各組大鼠子宮組織MVD和子宮組織細胞的形態(tài)學

6、改變。
　　結果：
　　1.不同時機艾灸對寒濕凝滯型PD大鼠行為學的影響:扭體行為學觀察結果顯示：艾灸干預后，預先灸組、即刻灸組、預先即刻灸組痛經大鼠的潛伏期均明顯延長、扭體次數減少、扭體總分降低，與模型組比較，差異均有統計學意義；3個艾灸組相比，即刻灸組、預先即刻灸組較預先灸組痛經大鼠的扭體次數及扭體總分均明顯減少和降低，預先即刻灸組較預先灸組痛經大鼠的潛伏期明顯延長；預先即刻灸組與即刻灸組比較，預先即刻灸組較即刻灸組痛經

7、大鼠的潛伏期明顯延長、扭體次數及扭體總分均明顯減少和降低。
　　2.不同時機艾灸對寒濕凝滯型PD大鼠子宮組織細胞病理形態(tài)學的影響:子宮組織HE染色后，置于光鏡下，一般形態(tài)學觀察顯示：對照組大鼠子宮組織形態(tài)規(guī)則，無水腫，大量中性粒細胞；模型組大鼠子宮組織形態(tài)較規(guī)則，組織嚴重水腫，充血，大量中性粒細胞和淋巴細胞；預先灸組、即刻灸組、預先即刻灸組大鼠子宮組織均形態(tài)規(guī)則，組織輕度水腫，無充血，大量中性粒細胞，少量淋巴細胞。
　　3.

8、不同時機艾灸對寒濕凝滯型PD大鼠子宮組織MVD值的影響:模型組大鼠子宮組織MVD明顯減少，與對照組比較，差異有統計學意義；預先灸組、即刻灸組、預先即刻灸組與模型組比較，3個艾灸組痛經大鼠子宮組織MVD均明顯增多，差異有統計學意義；預先即刻灸組與預先灸組比較，預先即刻灸組較預先灸組MVD明顯增多；即刻灸組與預先灸組比較，即刻灸組較預先灸組MVD雖有數值差異，但無統計學差異。預先即刻灸組與即刻灸組比較，預先即刻灸組較即刻灸組雖有數值差異，但

9、無統計學差異。
　　4.不同時機艾灸對寒濕凝滯型PD大鼠血漿TXB2和6-keto-PGF1α含量的影響:模型組痛經大鼠血漿TXB2含量及TXB2/6-keto-PGF1α比值均明顯升高、6-keto-PGF1α含量明顯降低，與對照組相比，差異均有統計學意義；艾灸干預后，預先灸組、即刻灸組、預先即刻灸組痛經大鼠血漿TXB2含量及TXB2/6-keto-PGF1α比值均明顯降低、6-keto-PGF1α含量明顯升高，與模型組相比，差

10、異均有統計學意義；預先即刻灸組與預先灸組比較，預先即刻灸組較預先灸組痛經大鼠血漿TXB2含量及TXB2/6-keto-PGF1α比值均明顯降低，6-keto-PGF1α含量明顯升高；即刻灸組與預先灸組比較，即刻灸組較預先灸組血漿TXB2、6-keto-PGF1α含量及TXB2/6-keto-PGF1α比值雖有數值差異，但無統計學意義；預先即刻灸組與即刻灸組比較，預先即刻灸組較即刻灸組痛經大鼠血漿 TXB2含量及 TXB2/6-keto-

11、PGF1α比值均明顯降低、6-keto-PGF1α含量明顯升高。
　　5.不同時機艾灸對寒濕凝滯型PD大鼠子宮組織PGF2α、PGE2含量及PGF2α/PGE2比值的影響：模型組痛經大鼠子宮組織PGF2α的含量及PGF2α/PGE2比值均明顯升高，PGE2的含量明顯降低，與對照組比較，差異均有統計學意義。艾灸干預后，預先灸組、即刻灸組、預先即刻灸組痛經大鼠子宮組織PGF2α的含量及PGF2α/PGE2比值均明顯降低、PGE2含量明

12、顯升高，與模型組相比，差異均有統計學意義。預先即刻灸組與預先灸組比較，預先即刻灸組較預先灸組子宮組織PGF2α的含量及PGF2α/PGE2比值均明顯降低，PGE2的含量明顯升高。即刻灸組與預先灸組比較，即刻灸組較預先灸組 PGF2α的含量及PGF2α/PGE2比值均明顯降低，PGE2含量明顯升高。預先即刻灸組與即刻灸組比較，預先即刻灸組較刻灸組痛經大鼠子宮組織PGF2α的含量及PGF2α/PGE2比值均明顯降低，PGE2的含量明顯升高。

13、
　　6。不同時機艾灸對寒濕凝滯型PD大鼠子宮組織AVP含量的影響：模型組痛經大鼠子宮組織AVP的含量明顯升高，與對照組比較，差異有統計學意義。艾灸干預后，預先灸組、即刻灸組、預先即刻灸組3個艾灸組痛經大鼠子宮組織AVP含量均明顯降低，與模型組比較，差異有統計學意義。預先即刻灸組、即刻灸組、預先灸組3組兩兩比較，3組子宮組織AVP含量雖各有數值差異，但無統計學意義。
　　7.不同時機艾灸對寒濕凝滯型PD大鼠子宮組織ET-1、

14、NO含量的影響:模型組痛經大鼠子宮組織ET-1的含量明顯升高，NO的含量明顯降低，與對照組比較，差異均有統計學意義。艾灸干預后，預先灸組、即刻灸組、預先即刻灸組痛經大鼠子宮組織ET-1的含量明顯降低、NO含量明顯升高，與模型組相比，差異均有統計學意義。預先即刻灸組與預先灸組比較，預先即刻灸組較預先灸組子宮組織ET-1的含量明顯降低、NO的含量明顯升高。即刻灸組與預先灸組比較，即刻灸組較預先灸組ET-1的含量明顯降低、NO含量明顯升高。預

15、先即刻灸組與即刻灸組比較，預先即刻灸組較刻灸組痛經大鼠子宮組織ET-1的含量明顯降低、NO的含量明顯升高。
　　結論：
　　1.預先灸、即刻灸及預先即刻灸的不同時機介入均可明顯減輕寒濕凝滯型PD大鼠腹部收縮及扭體反應，明顯延長其潛伏期，但其效果尤以預先即刻灸最為明顯，即刻灸次之。說明不同時機艾灸對寒濕凝滯型PD模型大鼠均有良好的鎮(zhèn)痛效果，但預先即刻灸的效果更加顯著。
　　2.三種不同時機艾灸均可改善寒濕凝滯型PD模型大

16、鼠子宮組織充血、水腫狀態(tài)。但預先灸、即刻灸及預先即刻灸3組之間對大鼠子宮組織病理形態(tài)學改變無明顯差異。
　　3.三種不同時機艾灸均可增加寒濕凝滯型PD模型大鼠子宮組織MVD，有效改善子宮局部微循環(huán)。但其中尤以預先即刻灸組效果最佳，明顯優(yōu)于預先灸和即刻灸。其作用可能是通過艾火的溫通、經絡的傳熱及神經的傳遞對子宮產生的熱效應，以增加血流量，改變局部血液循環(huán)，進而達到緩解疼痛之目的。
　　4.三種不同時機艾灸均可降低寒濕凝滯型PD

17、模型大鼠血漿TXB2含量及TXB2/6-keto-PGF1α比值；升高6-keto-PGF1α的含量，其中尤以預先即刻灸最為明顯。說明不同時機艾灸對上述各項指標水平均有良好的調節(jié)作用，但預先即刻灸的調節(jié)作用更加顯著。其作用機制可能是通過調節(jié)血小板活性和血管張力，改善血管收縮狀態(tài)，使子宮局部血流量增加，而達到止痛之目的。
　　5.三種不同時機艾灸均可降低寒濕凝滯型PD模型大鼠子宮組織PGF2α含量及PGF2α/PGE2比值；提高PG

18、E2的水平，但其作用尤以預先即刻灸最為明顯，即刻灸次之。說明不同時機艾灸對PGF2α和PGE2的異常水平均有良好的調節(jié)作用，且預先即刻灸的調節(jié)作用更加顯著，其作用機制可能是通過恢復PGF2α和PGE2的平衡，改善機體內分泌環(huán)境，進而抑制子宮平滑肌及血管痙攣性收縮，改善局部的缺血缺氧狀態(tài)，從而起到鎮(zhèn)痛作用。
　　6.三種不同時機艾灸均可明顯降低寒濕凝滯型PD模型大鼠子宮組織AVP含量，且三者之間無明顯差異。其作用機制可能是通過降低A