健脾消痰方對高脂血癥大鼠AQP3、AQP4表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察健脾消痰方對高脂血癥大鼠血清中甘油三酯（TG）、膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）的含量及結(jié)腸組織中水通道蛋白3（AQP3）、水通道蛋白4（AQP4）表達(dá)的影響，探討其對高脂血癥的治療作用及其可能的作用機(jī)制。
　　方法：選用60只健康的SD大鼠，體重在160g~180g，雄性，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，按照體重分層的原則，隨機(jī)分為6組，分別是：正常對照組（簡稱正常組）、模型對照組（

2、簡稱模型組）、辛伐他汀對照組（簡稱對照組）、健脾消痰方低劑量組（簡稱低劑量組）、健脾消痰方中劑量組（簡稱中劑量組）、健脾消痰方高劑量組（簡稱高劑量組）。采用喂飼高脂飼料的方法復(fù)制高脂血癥模型，除正常組喂飼普通飼料外，其余各組均喂飼高脂飼料。與此同時(shí)，正常組與模型組灌服適量蒸餾水，其余各組灌服治療藥或?qū)φ账?，用藥量均按?ml/100g計(jì)算。第5周末，于最后一次給藥后，將大鼠禁食不禁水24小時(shí)，麻醉狀態(tài)下，股動(dòng)脈取血，將血樣離心，分離血清

3、，檢測血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C的含量，并迅速剖取肝臟，將肝臟最大葉部分肝組織放入4％的多聚甲醛溶液中，用于病理觀察。同時(shí)剖取結(jié)腸，取位置相對固定的3塊結(jié)腸組織，剪開沖洗干凈后，將其中1塊放入4%多聚甲醛溶液中，運(yùn)用免疫組織化學(xué)法觀察AQP3及AQP4的表達(dá)，其余2塊放入凍存管內(nèi)，運(yùn)用RT-PCR及Western Blot法觀察AQP3mRNA、AQP4mRNA、AQP3及AQP4的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.

4、各組大鼠血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C含量的變化:與正常組相比，模型組大鼠血清中TC、TG、LDL-C的含量均明顯升高，HDL-C含量明顯降低，提示大鼠造模成功。藥物干預(yù)后，各用藥組TG、TC、LDL-C的含量均較模型組降低， HDL-C含量均升高；與對照組相比，高劑量組血脂無明顯變化，中、低劑量組TG、TC、LDL-C的含量升高，HDL-C含量降低；健脾消痰方各劑量組之間比較，高劑量組TG、TC、LDL-C的含量低于中、低劑

5、量組，HDL-C的含量高于中、低劑量組；與低劑量組相比，中劑量組TC含量降低，但TG、HDL-C、LDL-C的含量無顯著差異。
　　2.各組大鼠的肝組織形態(tài)學(xué)的變化:正常組大鼠肝組織肝細(xì)胞排列整齊，形狀為規(guī)則六邊形，圍繞中央靜脈呈放射狀分布，肝血竇結(jié)構(gòu)清晰，無脂肪滴及炎性細(xì)胞浸潤。模型組大鼠肝組織中肝細(xì)胞排列混亂，且出現(xiàn)大量脂肪滴，細(xì)胞核位置被擠壓偏離，肝血竇充血水腫。對照組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，脂肪滴明顯減少，肝血竇充血水腫減輕，但存

6、在細(xì)胞壞死及炎性細(xì)胞浸潤。健脾消痰方低中高劑量組較模型組結(jié)構(gòu)排列清晰，脂肪滴也不同程度減少，肝血竇形態(tài)趨于正常，尤以高劑量組效果顯著。
　　3.各組大鼠結(jié)腸組織中AQP3表達(dá)的變化:免疫組織化學(xué)法：正常組大鼠陽性細(xì)胞表達(dá)相對較少，著色較淺，模型組大鼠結(jié)腸上皮細(xì)胞的細(xì)胞核、細(xì)胞漿及腸腺上皮細(xì)胞陽性表達(dá)相對較多，著色較深，結(jié)締組織有少量陽性表達(dá)，提示模型組大鼠結(jié)腸組織AQP3的表達(dá)較正常組明顯升高。對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組

7、陽性細(xì)胞的表達(dá)及著色程度依次降低；藥物干預(yù)后，各用藥組AQP3的表達(dá)均低于模型組；其中，高、中、低劑量組AQP3的表達(dá)明顯低于對照組；三個(gè)劑量組中，高劑量組AQP3明顯低于中、低劑量組；中劑量組AQP3的表達(dá)又低于低劑量組。
　　RT-PCR法：模型組大鼠結(jié)腸組織AQP3mRNA的表達(dá)較正常組明顯升高；藥物干預(yù)后，各用藥組AQP3mRNA的表達(dá)均低于模型組；其中，高、中劑量組AQP3mRNA的表達(dá)低于對照組，而低劑量組與對照組相比

8、無差異；三個(gè)劑量組中，高劑量組AQP3mRNA低于中、低劑量組，中劑量組AQP3mRNA的表達(dá)有低于低劑量組。
　　Western Blot法：研究結(jié)果顯示，模型組大鼠結(jié)腸組織AQP3的表達(dá)較正常組明顯升高；藥物干預(yù)后，各用藥組AQP3的表達(dá)均低于模型組；其中，高、中劑量組AQP3的表達(dá)明顯低于對照組，而低劑量組與對照組相比無差異；三個(gè)劑量組中，高劑量組AQP3的表達(dá)明顯低于中、低劑量組，中劑量組AQP3的表達(dá)又低于低劑量組。

9、r>　　4.各組大鼠結(jié)腸組織中AQP4表達(dá)的變化。免疫組織化學(xué)法：正常組大鼠陽性細(xì)胞表達(dá)相對較少，著色較淺，模型組大鼠結(jié)腸上皮細(xì)胞的細(xì)胞核、細(xì)胞漿及腸腺上皮細(xì)胞陽性表達(dá)相對較多，著色較深，結(jié)締組織有少量陽性表達(dá)，提示模型組大鼠結(jié)腸組織中AQP4的表達(dá)較正常組明顯升高。對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組陽性細(xì)胞的表達(dá)及著色程度依次降低；藥物干預(yù)后，各用藥組AQP4的表達(dá)均低于模型組；其中，高、中、低劑量AQP4的表達(dá)低于對照組；三個(gè)劑量

10、組中，高劑量組AQP4的表達(dá)低于中、低劑量組，中劑量組AQP4的表達(dá)與低劑量組無顯著差異。
　　RT-PCR法：模型組大鼠結(jié)腸中AQP4mRNA的表達(dá)較正常組明顯升高；藥物干預(yù)后，各用藥組AQP4mRNA的表達(dá)均低于模型組；其中，高、中劑量AQP4mRNA的表達(dá)明顯低于對照組，而低劑量組與對照組相比無顯著性差異。三個(gè)劑量組中，高劑量組AQP4mRNA的表達(dá)低于中、低劑量組，中劑量組AQP4mRNA的表達(dá)又低于低劑量組。
　　

11、Western Blot法：模型組大鼠結(jié)腸中AQP4的表達(dá)較正常組明顯升高；藥物干預(yù)后，各用藥組AQP4的表達(dá)均低于模型組；其中，對照組AQP4的表達(dá)明顯高于低、中、高劑量。三個(gè)劑量組中，高劑量組AQP4的表達(dá)低于中、低劑量組，中劑量組AQP4的表達(dá)又低于低劑量組。
　　結(jié)論：
　　1.健脾消痰方能夠降低血清中TC、TG、LDL-C水平，升高HDL-C水平，減輕肝細(xì)胞的脂變程度，具有良好地調(diào)節(jié)血脂作用。
　　2.健脾消