雌、孕激素及雌激素受體拮抗劑對人子宮內(nèi)膜樣癌JEC細胞中ER、PR、P57kip2表達影響的研究.pdf

1、本文對雌、孕激素及雌激素受體拮抗劑對人子宮內(nèi)膜樣癌JEC細胞中ER、PR、P57kip2表達影響進行了研究。本研究分為兩個部分：
　　第一部分：雌、孕激素對人子宮內(nèi)膜樣癌JEC細胞中ER、PR、P57kip2表達影響的研究。
　　目的：研究雌、孕激素對人子宮內(nèi)膜樣癌（endometrioid carcinoma,EC）JEC細胞中雌激素受體（estrogen receptor, ER）亞型ERα、ERβ，孕激素受體（prog

2、esterone receptor, PR）亞型PR-A、PR-B，及p57kip2蛋白表達的影響，以探討女性激素調控、細胞周期調控與EC發(fā)生發(fā)展之間的關系。
　　方法：實驗組：分別用三種不同濃度的雌二醇（β-estradiol, E2）（10-6 mol/L、10-8 mol/L、10-10 mol/L）、孕酮（Progesterone, P）（10-4 mol/L、10-6 mol/L、10-8 mol/L）干擾體外培養(yǎng)的JE

3、C細胞（中分化EC細胞）；對照組：用不含藥物的等量培養(yǎng)基培養(yǎng)JEC細胞。分別培養(yǎng)24、48、72、96h后，用MTT法觀察JEC細胞的生長情況；培養(yǎng)24、48、72h后，在光鏡、電鏡下觀察JEC細胞的生長情況及超微結構變化，用免疫蛋白印跡（Western Blot, WB）法檢測JEC細胞中ERα、ERβ、PR-A、PR-B、p57kip2蛋白的表達情況。
　　結果：⑴隨著E2、P干擾時間的延長，對照組與實驗各組JEC細胞均逐漸增

4、長（P<0.05）。E2三種濃度均可促進JEC細胞的生長，且隨藥物濃度的增高促進作用更明顯（P<0.05）；P低、中濃度組可促進JEC細胞的生長，高濃度組則抑制JEC細胞的生長（P<0.05）。⑵培養(yǎng)72h后，對照組JEC細胞呈多邊形、長梭形、不規(guī)則形，可見腺腔樣結構,伴少量細胞凋亡。與對照組比較，E2各濃度組細胞密度均明顯增加，以高濃度組最甚；P低、中濃度組細胞密度明顯增加，高濃度組則減小。各組細胞形態(tài)變化不明顯。⑶培養(yǎng)72h后，對照

5、組JEC細胞呈圓形或橢圓形，表面有微絨毛，胞質中可見分泌泡、線粒體、內(nèi)質網(wǎng)、高爾基復合體等細胞器，還可見次級溶酶體，核呈不規(guī)則形，核仁明顯。與對照組比較，E2各濃度組部分細胞分泌泡不明顯、內(nèi)質網(wǎng)腫脹，可見自噬現(xiàn)象，中、高濃度組細胞表面微絨毛腫脹，尤以高濃度組最明顯；P各濃度組胞質內(nèi)均可見自噬現(xiàn)象，高濃度組細胞表面微絨毛及胞質內(nèi)分泌泡均增多。⑷三種不同濃度E2、P干擾后，對照組及實驗各組JEC細胞均無ERα、PR-A、PR-B蛋白的表達，

6、ERβ與p57kip2蛋白有不同程度表達。E2干擾后ERβ、p57kip2蛋白的表達情況：隨著E2干擾時間的延長、作用濃度的增加，ERβ蛋白表達增加，p57kip2蛋白表達降低（P<0.05）。ERβ蛋白、p57kip2蛋白表達之間具有負線性相關關系。P干擾后ERβ、p57kip2蛋白的表達情況：相同作用時間比較：隨著藥物作用濃度的增高，ERβ蛋白在24、72h表達逐漸增加，在48h高濃度組表達最高，中濃度組表達最低（P<0.05）；p

7、57kip2蛋白隨著藥物作用濃度的增高表達增高（P<0.05）。相同作用濃度比較：隨著P干擾時間延長，高濃度組ERβ蛋白表達逐漸增高，低、中濃度組在72h表達最高，在48h表達最低（P<0.05）；p57kip2蛋白隨P干擾時間的延長表達增高（P<0.05）。ERβ蛋白、p57kip2蛋白表達之間無相關關系。
　　結論：EC的生長、分化均可能受到女性激素及細胞周期的調控。E2可能通過上調JEC細胞中ERβ蛋白的表達、抑制p57ki

8、p2蛋白的表達，以解除p57kip2負向調控細胞周期進程的作用，明顯促進JEC細胞的生長，并使其向更差的分化方向發(fā)展；P可上調JEC細胞中ERβ、p57kip2蛋白的表達，濃度較低時以ERβ蛋白促細胞生長的作用為主，濃度較高時則以p57kip2蛋白阻滯細胞周期進程的作用為主導，使腫瘤細胞向較好的分化方向發(fā)展；JEC細胞均不表達ERα、PR-A、PR-B蛋白，且E2、P均無法誘導其表達。聯(lián)合檢測ERα、ERβ、PR-A、PR-B、p57k

9、ip2蛋白在EC中的表達情況，可能更有利于評估EC的發(fā)生發(fā)展。
　　第二部分：雌激素受體拮抗劑對人子宮內(nèi)膜樣癌JEC細胞中ER、PR、P57kip2表達影響的研究。
　　目的：研究雌激素受體拮抗劑對人子宮內(nèi)膜樣癌（endometrioid carcinoma,EC）JEC細胞中雌激素受體（estrogen receptor, ER）亞型ERα、ERβ，孕激素受體（progesterone receptor, PR）亞型PR-

10、A、PR-B，以及p57kip2蛋白表達的影響，以進一步探討雌激素調控、細胞周期調控與EC發(fā)生發(fā)展之間的關系。
　　方法：實驗組：分別用兩種ER拮抗劑【他莫昔芬（Tamoxifen，TAM）（10-6mol/L），氟維司群（Fulvestrant，ICI182780）（10-6mol/L）】及雌二醇（β-Estradiol, E2）（10-6mol/L）干擾體外培養(yǎng)的JEC細胞（中分化EC細胞）；對照組：用不含藥物的等量培養(yǎng)基培養(yǎng)

11、JEC細胞。分別培養(yǎng)24、48、72、96h后，用MTT法觀察JEC細胞的生長情況；培養(yǎng)24、48、72h后，在光鏡、電鏡下觀察JEC細胞的生長情況與超微結構變化，用免疫蛋白印跡（Western Blot, WB）法檢測JEC細胞中ERα、ERβ、PR-A、PR-B、p57kip2蛋白的表達情況。
　　結果：⑴隨著藥物干擾時間的延長，對照組與實驗各組JEC細胞均逐漸增長（P<0.05）。與對照組比較，E2組細胞增殖能力增強（P<0

12、.05），ICI182780組細胞增殖能力降低（P<0.05），TAM組細胞增殖能力增強（P>0.05）；與E2組比較，E2+ICI182780組細胞增殖能力降低（P<0.05），E2+TAM組細胞增殖能力降低（P>0.05）。⑵培養(yǎng)72h后，對照組JEC細胞呈多邊形、長梭形、不規(guī)則形，可見腺腔樣結構，伴少量細胞凋亡。與對照組比較，E2組細胞密度增大，ICI182780組細胞密度減小，其他各組細胞密度變化不明顯；與E2組比較，E2+TA

13、M組與E2+ICI182780組細胞密度均減小；各組細胞形態(tài)變化不明顯。⑶培養(yǎng)72h后，對照組JEC細胞呈圓形或橢圓形，表面有微絨毛，胞質中可見線粒體、內(nèi)質網(wǎng)、高爾基復合體等細胞器，還可見次級溶酶體，分泌泡不明顯，偶見脂滴；核呈不規(guī)則形，核仁明顯。與對照組比較，E2組細胞病理性核分裂象易見；ICI182780組部分細胞胞質中自噬現(xiàn)象增多。與E2組比較，E2+TAM組與E2+ICI182780組細胞病理性核分裂象少見。⑷對照組及實驗各組J

14、EC細胞均無ERα、PR-A、PR-B蛋白的表達，ERβ與p57kip2蛋白有不同程度的表達。ER拮抗劑干擾后ERβ蛋白的表達情況：相同作用時間比較：與對照組比較，ERβ蛋白在E2組表達增加，在TAM組與ICI182780組表達均減少，且ICI182780組減少更明顯（P<0.05）。與E2組比較，ERβ蛋白在E2+TAM組與E2+ICI182780組表達均減少，且E2+ICI182780組減少更明顯（P<0.05）。相同藥物分組比較：

15、隨著藥物作用時間的延長，ERβ蛋白在E2組表達增加，在TAM組與ICI182780組表達減少（P<0.05）。ER拮抗劑干擾后p57kip2蛋白的表達情況：相同作用時間比較：與對照組比較，p57kip2蛋白在E2組表達減少，在TAM組與ICI182780組表達增加，且ICI182780組增加更明顯（P<0.05）。與E2組比較，p57kip2蛋白在E2+TAM組與E2+ICI182780組表達均增加，且E2+ICI182780組增加更明

16、顯（P<0.05）。相同藥物分組比較：隨著藥物作用時間的延長，p57kip2蛋白在E2組表達減少，在TAM組與ICI182780組表達增加（P<0.05）。TAM與ICI182780干擾后， ERβ蛋白、p57kip2蛋白表達之間均具有負線性相關關系。
　　結論：ICI182780有較強的拮抗雌激素的作用，可能通過下調JEC細胞中ERβ蛋白的表達，誘導p57kip2蛋白的表達增加，發(fā)揮其阻滯細胞周期進程的作用，抑制腫瘤細胞的生長；