納米磁球定序可控固定化蛋白的研究.pdf

1、酶的級聯(lián)反應(yīng)往往需要多種酶以不同比例協(xié)同作用，但是目前多酶共固定的研究較少，控制多酶固定順序及比例的研究更為少見。本文旨在開發(fā)一種體外比例可控且定序固定多酶的方法。
　　本文選擇核殼式納米磁球作為固定載體，一種是Fe3O4/PVIM-Ni2+，其表面的鎳離子可以和His標(biāo)簽特異性結(jié)合;一種是Fe3O4-Au，其表面的金粒子可以和硫醇共價(jià)結(jié)合。我們設(shè)計(jì)了兩類支架蛋白:Ⅰ類支架蛋白含有His標(biāo)簽、硫醇基和olpB黏合域（1～7個(gè)不等）

2、，一方面可與納米磁性微球結(jié)合，另一方面根據(jù)黏合域和相應(yīng)錨定域(docCipA)之間的特異性結(jié)合作用可固定融合了錨定域的蛋白（本文選用綠色熒光蛋白GFP和紅色熒光蛋白DsRed為模型來進(jìn)行研究）。Ⅰ類支架蛋白的單酶多層固定表明:熒光蛋白的負(fù)載量隨著支架蛋白上結(jié)合位點(diǎn)的增多先增加后減少，當(dāng)結(jié)合位點(diǎn)為四個(gè)時(shí)達(dá)到最大值(0.937μmol/g)。
　　Ⅱ類支架蛋白具有His標(biāo)簽和兩種黏合域A和C，分別和錨定域docA、docC結(jié)合，設(shè)計(jì)不