LA霜的制備、初步功效與安全性研究.pdf

1、熊果苷（arbutin）是從多種植物中分離得到的天然活性物質(zhì)，其化學(xué)名為4-羥苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷（簡稱β-熊果苷）?；瘖y品中廣泛應(yīng)用于去除皮膚雀斑、老人斑、黃褐斑等色素沉積導(dǎo)致的色斑當(dāng)中。但是，由于熊果苷能夠在一定條件下被健康人體表面的微生物轉(zhuǎn)化為氫醌，對人體帶來致敏風(fēng)險(xiǎn)。引起不良反應(yīng)的祛斑類產(chǎn)品中約59％的產(chǎn)品配方使用了熊果苷原料[1]，因此，探討通過中藥揮發(fā)油促透作用減少熊果苷的含量，具有較好的應(yīng)用價(jià)值。
　　檸檬(C

2、itrus lemon(L)Burm.F.)屬于蕓香科（Rutaceae）柑橘屬常綠小喬木，含有豐富的揮發(fā)油，因其具有滋潤養(yǎng)顏、淡化色斑、美白嫩膚等功效，常作為功能性成分應(yīng)用在具有保濕、祛斑、美白的爽膚水中。另外，由于其較好的促進(jìn)滲透的作用，也常作為天然促透劑使用，廣泛應(yīng)用于化妝品、醫(yī)藥等領(lǐng)域。
　　本論文以β-熊果苷為主要功能性活性物質(zhì)，檸檬揮發(fā)油作為具有輔助美白功能的促透劑，篩選復(fù)配處方，制備具有美白祛斑功效的特殊化妝品。一方

3、面減少β-熊果苷的使用量，另一方面增加具有協(xié)同美白功能的天然促透劑，為日后的工業(yè)生產(chǎn)提供理論依據(jù)。主要的研究內(nèi)容如下：
　?。?）建立適用于測定β-熊果苷原料含量的高效液相方法；建立測定檸檬揮發(fā)油中檸檬烯的氣相檢測方法，并分別測定兩種原料的含量。
　　（2）通過單因素實(shí)驗(yàn)確定檸檬果皮浸泡時(shí)間、液料比及提取時(shí)間對揮發(fā)油得率的影響，采用響應(yīng)面(BBD)設(shè)計(jì)法優(yōu)化檸檬揮發(fā)油的提取工藝。
　?。?）采用體外經(jīng)皮滲透實(shí)驗(yàn)方法，考

4、察揮發(fā)油自身透皮特性與促進(jìn)β-熊果苷的透皮性能，篩選出檸檬揮發(fā)油與β-熊果苷的使用量。
　?。?）采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法對制劑處方進(jìn)行優(yōu)化，分別以乳化劑、潤膚劑、增稠劑及保濕劑用量作為四個(gè)因素，進(jìn)行四因素三水平試驗(yàn)L9(3)4，將最佳處方條件下制備的制劑命名為LA霜；通過制劑的質(zhì)量控制方法，考察LA霜的成型性、穩(wěn)定性；考察LA霜中檸檬揮發(fā)油對β-熊果苷的促滲效果。
　?。?）通過生化酶法測定LA霜的美白功效。初步探討LA霜的豚鼠

5、皮膚刺激性，按照《2007版化妝品規(guī)范》中皮膚刺激實(shí)驗(yàn)的評分標(biāo)準(zhǔn)評分并進(jìn)行皮膚組織學(xué)檢查。
　　結(jié)果：
　?。?）建立β-熊果苷的HPLC檢測方法，測定β-熊果苷原料的含量為95.0%。該方法專屬性良好，精密度RSD為1.50%，重復(fù)性RSD為0.50%，加樣回收率RSD為1.57%，穩(wěn)定性為在24h內(nèi)穩(wěn)定，RSD為0.38%，該方法結(jié)果良好，穩(wěn)定可行；采用內(nèi)標(biāo)法測定自提檸檬揮發(fā)油中的檸檬烯的平均百分含量為33.72%。該方

6、法精密度RSD為4%，重復(fù)性RSD為1.13%，加樣回收率RSD為1.3%，穩(wěn)定性為在24h穩(wěn)定，RSD為1.08%，該方法結(jié)果良好，穩(wěn)定可行。
　　（2）響應(yīng)面法優(yōu)化的檸檬揮發(fā)油提取工藝為：液料比（ml/g）為10:1，提取時(shí)間3.35h、浸泡時(shí)間5h，此工藝條件下提取率為2.28%。
　?。?）檸檬揮發(fā)油自身透皮實(shí)驗(yàn)中：檸檬烯的透皮速率呈濃度依賴性，單位面積累積透過量在2-24h之間呈現(xiàn)明顯的規(guī)律性：5.0%>3.0%>

7、1.0%；表明檸檬揮發(fā)油具有較高的皮膚透過性。檸檬揮發(fā)油促進(jìn)β-熊果苷體外促透實(shí)驗(yàn)：
　　①等量的β-熊果苷，增滲倍數(shù)ER比較，促透能力為：3.0%氮酮>2.0%氮酮>3.0%揮發(fā)油>2.0%揮發(fā)油>1.0%氮酮>1.0%揮發(fā)油。3.0%的揮發(fā)油與3.0%氮酮的ER分別是1.9465、1.9687，差距較小，故選擇3.0%的揮發(fā)油作為制劑的促透劑。
　　②以3.0%揮發(fā)油作為促透劑，濃度分別為1.0%，2.0%，3.0%的β

8、-熊果苷增滲倍數(shù)分別為1.9499、1.9005、1.9315。進(jìn)一步計(jì)算得：與β-熊果苷3.0%的常規(guī)用量比較，加入3.0%的檸檬揮發(fā)油復(fù)配后，可減少1.45%的β-熊果苷的使用量，確定β-熊果苷的用量為1.55%。
　?。?）正交實(shí)驗(yàn)L9(3)4最佳處方結(jié)果：在100g處方組成中，去離子水85g、甘油9g、油酸聚乙二醇甘油酯3g、聚乙二醇-7-硬脂酸酯2g、硬脂酸甘油酯2g，二甲基硅油3g、蜂蠟1.5g、卡波姆0.15g、漢生

9、膠0.25g、檸檬揮發(fā)油3.0g，β-熊果苷1.55g。此組合制得的霜?jiǎng)┪锢矸€(wěn)定性好，霜?jiǎng)╊w粒均勻細(xì)膩，簡稱LA霜。LA霜的滲透速率：5.2227 ug?cm-2?h-1，LA霜促透劑陰性的滲透速率：3.3782 ug?cm-2?h-1，增滲1.55倍。說明LA霜中加入檸檬揮發(fā)油可以有效促進(jìn)β-熊果苷的經(jīng)皮吸收。
　?。?）美白功效實(shí)驗(yàn)，最佳實(shí)驗(yàn)條件是：L-酪氨酸溶液的量為0.8mL、酪氨酸酶的量為0.40mL、恒溫水浴時(shí)間為10

10、min、反應(yīng)時(shí)間為5min。在該最佳反應(yīng)體系中，測定了LA霜對酪氨酸酶的抑制作用。測定結(jié)果為起始抑制率：LA霜>LA霜檸檬揮發(fā)油陰性樣品>LA霜β-熊果苷陰性樣品；抑制速率：LA霜>LA霜檸檬揮發(fā)油陰性樣品>LA霜β-熊果苷陰性樣品；最大抑制率：LA霜≈LA霜檸檬揮發(fā)油陰性樣品>LA霜β-熊果苷陰性樣品。說明LA霜的酪氨酸酶抑制率較好，具有良好的皮膚。在刺激性實(shí)驗(yàn)中，結(jié)果如下：
　?、俳?jīng)獨(dú)立樣本檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析，在多次實(shí)驗(yàn)中，在3%揮

11、發(fā)油LA霜p>0.05，完整皮膚與空白基質(zhì)組比較無顯著性差異，對完整皮膚無刺激性；對破損皮膚p<0.05，與空白基質(zhì)組比較有顯著性差異，對破損皮膚有輕度刺激。在5%與8%揮發(fā)油LA霜p<0.01，與空白基質(zhì)組比較有極顯著性差異，表明此濃度LA霜對完整與破損皮膚都有輕度和中度的刺激性。
　?、谄つw組織學(xué)檢查，3%揮發(fā)油LA霜使得完整皮膚的角質(zhì)層松動(dòng)，但是表皮連貫，厚度均勻，未損傷真皮和毛囊。高濃度的LA霜對完整與破損皮膚可致其角質(zhì)層

12、斷裂、脫落，表皮不連貫、厚度不均勻，甚至改變真皮中毛囊的形態(tài)并阻止其生長，產(chǎn)生毛囊溢出。
　　結(jié)論：
　　（1）LA霜最佳處方（100g）：檸檬揮發(fā)油3.0g、β-熊果苷1.55g、去離子水85g、甘油9g、油酸聚乙二醇甘油酯3g、聚乙二醇-7-硬脂酸酯2g、硬脂酸甘油酯2g、二甲基硅油3g、蜂蠟1.5g、卡波姆0.15、漢生膠0.25g。此處方制得的霜?jiǎng)┓€(wěn)定性好，顆粒均勻細(xì)膩。美白功效測定，LA霜具有較強(qiáng)的酪氨酸酶抑制作用