高表達(dá)的HIWI調(diào)節(jié)TβR和CDK與乳腺癌預(yù)后關(guān)系的研究.pdf

1、研究目的：探索異常表達(dá)的PIWI基因在人類惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中起著的重要作用，本課題研究PIWI的人類同源基因HIWI在乳腺癌患者中的表達(dá)水平，及HIWI基因促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞群增殖機(jī)制及抑制乳腺癌細(xì)胞群細(xì)胞凋亡機(jī)制，探索HIWI是否能夠作為未來臨床上評價乳腺癌患者治療及預(yù)后的潛在生化標(biāo)志物。
　　方法：通過實(shí)時聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)分別檢測以下各組織：25例為癌旁正常乳腺組織；19例為Ⅰ-Ⅱ期，無腋窩淋巴結(jié)等轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織；8例為Ⅲ-Ⅳ

2、期，且腋窩淋巴結(jié)等已經(jīng)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織，并用Western blotting檢測各組組織蛋白表達(dá)水平。對MCF-7乳腺癌細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng)，獲得其后代細(xì)胞群。構(gòu)建HIWI基因過表達(dá)和敲除載體，分別為HIWI-pcDNA3.1和 HIWI-shRNA，將其與 HIWI基因結(jié)合，然后使用LipofectamineTM2000試劑將構(gòu)建成功的載體對后代乳腺癌細(xì)胞株進(jìn)行轉(zhuǎn)染，并分為五個組（1、對照組；2、HIWI干擾組；3、HIWI過表達(dá)組；4、H

3、IWI干擾救援組；5、HIWI過表達(dá)救援組）。通過PCR和Western blot測算HIWI mRNA與蛋白表達(dá)量，同時以細(xì)胞流式分析測算細(xì)胞凋亡率。最后測試CDK4、CDK6、CDK8、TβRⅠ與TβRⅡ的表達(dá)水平同HIWI表達(dá)的相關(guān)性。
　　結(jié)果：PCR與Western blot檢測結(jié)果顯示乳腺癌組織中MAEL、HIWI與HILI相對mRNA表達(dá)量明顯增高，而PIWIL3與HIWI2無明顯改變。轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞株檢測結(jié)果顯示過表

4、達(dá)組呈現(xiàn)HIWI mRNA的最高表達(dá)，干擾組呈現(xiàn)HIWI mRNA的最低表達(dá)，而對照組、過表達(dá)救援組和干擾救援組則呈現(xiàn)出相對平均水平，且過表達(dá)組與干擾組表達(dá)水平與其余三組相比，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。HIWI在蛋白質(zhì)表達(dá)方面，過表達(dá)組和其他組相比探測到最強(qiáng)信號而干擾組則探測到最弱信號。在Cyclin D和CDK基因的mRNA及蛋白表達(dá)方面，HIWI過表達(dá)組中CDK4、CDK6和CDK8基因的表達(dá)水平較其余四組都有明顯增高，且

5、與這幾組間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），但其余各組間卻無顯著差異，因此HIWI表達(dá)量與TβRⅠ、TβRⅡ、CDK4、CDK6和CDK8的表達(dá)相關(guān)（P＜0.05）。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示HIWI過表達(dá)組有最低的細(xì)胞凋亡率，而干擾組卻有最高的凋亡率，且這兩組與其他三組相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。另外，干擾組還表現(xiàn)出了明顯較高的細(xì)胞G2/M期阻滯率?；颊吣[瘤特定生存率與HIWI的較高表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。

6、>　　1.乳腺癌組織中HIWI與HILI的表達(dá)明顯增高，且與腫瘤分期密切相關(guān)。
　　2.高表達(dá)的HIWI能導(dǎo)致乳腺癌患者較差的預(yù)后，而HILI則欠缺這樣的相關(guān)性。HIWI是更為合適的評價乳腺癌疾病進(jìn)展與預(yù)后的潛在生化標(biāo)志物。
　　3.過表達(dá)的HIWI能夠提升細(xì)胞活性并抑制細(xì)胞凋亡，干擾HIWI的表達(dá)則細(xì)胞凋亡率明顯升高。
　　4.HIWI的表達(dá)與TβRⅠ和TβRⅡ表達(dá)水平有負(fù)相關(guān)性，而與CDK4、CDK6和CDK8基因