內(nèi)皮素-1通路對(duì)小鼠糖尿病心臟、血管并發(fā)癥的影響及分子機(jī)制研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開論述：
　　第一部分 內(nèi)皮素-1通路對(duì)小鼠糖尿病眼動(dòng)脈病變的影響及分子機(jī)制
　　目的：探討內(nèi)皮素-1通路對(duì)小鼠糖尿病眼動(dòng)脈病變的影響及內(nèi)皮素受體拮抗劑對(duì)糖尿病眼動(dòng)脈病變的潛在保護(hù)作用。
　　方法：將60只6周齡雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(Control)、糖尿病對(duì)照組(DM)、糖尿病藥物干預(yù)組(DM-B)，每組20只。鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射，連續(xù)5天以50mg/kg劑量建立

2、糖尿病模型。對(duì)DM-B組小鼠給予內(nèi)皮素受體拮抗劑波生坦(100mg/kg)灌胃，Control組、DM組給予同等劑量生理鹽水灌胃，每日1次，連續(xù)24周。24周后取眼動(dòng)脈標(biāo)本，進(jìn)行HE染色，TUNEL染色，實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)眼動(dòng)脈ET-1、VEGF、TNF-α、NF-kB、MMP-2、MMP-9的mRNA表達(dá)水平，Western Blot檢測(cè)VEGF、NF-kB、MMP-2、MMP-9蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：與Control組相

3、比，DM組及DM-B組空腹血糖升高(P＜0.05)，DM組與DM-B組相比，空腹血糖水平接近(P＞0.05)。眼動(dòng)脈HE染色，眼動(dòng)脈總厚度、各層厚度，DM組均低于DM-B組(P＜0.05)。TUNEL染色，Control組未見明顯細(xì)胞凋亡，細(xì)胞排列規(guī)則;DM組可見明顯的細(xì)胞凋亡，有核碎片出現(xiàn);DM-B組可見細(xì)胞凋亡，凋亡細(xì)胞數(shù)量較糖尿病組減少。實(shí)時(shí)定量PCR相對(duì)定量結(jié)果，Control組相比,DM組眼動(dòng)脈中ET-1、VEGF、TNF-α

4、、NF-kB、MMP-2、MMP-9mRNA的表達(dá)增加(P＜0.05);DM-B組與DM組相比，DM-B組ET-1、VEGF、TNF-α、NF-kB、MMP-2、MMP-9mRNA表達(dá)均降低(P＜0.05)。Western Blot檢測(cè)結(jié)果，DM組中VEGF、NF-kB、MMP-2、MMP-9mRNA蛋白的表達(dá)較Control組增加(P＜0.05);DM-B組VEGF、NF-kB、MMP-2、MMP-9mRNA表達(dá)均較DM組降低(P＜0

5、.05)。
　　小結(jié)：內(nèi)皮素受體拮抗劑波生坦阻斷ET-1通路，抑制ET-1過(guò)表達(dá)，減輕糖尿病小鼠眼動(dòng)脈病變。
　　第二部分 內(nèi)皮素-1通路對(duì)小鼠糖尿病主動(dòng)脈病變的影響及分子機(jī)制
　　目的：探討內(nèi)皮素-1通路對(duì)小鼠糖尿病主動(dòng)脈病變的影響及內(nèi)皮素受體拮抗劑對(duì)糖尿病主動(dòng)脈病變的潛在保護(hù)作用。
　　方法：將60只6周齡雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(Control)、糖尿病對(duì)照組(DM）、糖尿病藥物干預(yù)組(DM

6、-B)，每組20只。鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射，連續(xù)5天以50mg/kg劑量建立糖尿病模型。對(duì)DM-B組小鼠給予內(nèi)皮素受體拮抗劑波生坦(100mg/kg)灌胃，Control組、DM組給予同等劑量生理鹽水灌胃，每日1次，連續(xù)24周。24周后取主動(dòng)脈標(biāo)本，進(jìn)行油紅O染色，HE染色，實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)VEGF、ET-1、TNF-α、MMP-2、MMP-9的mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果：與Control組相比，DM組及DM-B組空腹血

7、糖升高(P＜0.05)，DM組與DM-B組相比，空腹血糖水平接近(P＞0.05)。主動(dòng)脈油紅O染色，Control組主動(dòng)脈較光滑，輕微動(dòng)脈粥樣硬化斑塊;DM組整個(gè)主動(dòng)脈粥樣硬化嚴(yán)重，斑塊明顯增加;DM-B組主動(dòng)脈粥樣硬化斑塊較DM組明顯減少。主動(dòng)脈HE染色，Control組小鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜光滑，無(wú)明顯斑塊形成，血管內(nèi)皮細(xì)胞及細(xì)胞核形態(tài)正常，排列規(guī)則，間質(zhì)未見炎性細(xì)胞浸潤(rùn);DM組主動(dòng)脈內(nèi)膜欠光滑，脂質(zhì)沉著、斑塊形成明顯，平滑肌纖維排列紊亂，

8、血管內(nèi)皮明顯增生，血管內(nèi)皮細(xì)胞及細(xì)胞核形態(tài)異常，間質(zhì)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn);DM-B組斑塊負(fù)荷明顯減輕，血管內(nèi)皮增生減輕，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少。實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)，DM組與DM-B組VEGF mRNA表達(dá)低于Control組(P＜0.05)，而ET-1、TNF-α、MMP-2、MMP-9mRNA表達(dá)高于Control組(P＜0.05)。DM-B組VEGF mRNA表達(dá)較DM組升高(P＜0.05)，ET-1、TNF-α、MMP-2、MMP-9mRN

9、A表達(dá)較DM組降低(P＜0.05)。
　　小結(jié)：內(nèi)皮素受體拮抗劑波生坦阻斷ET-1通路，抑制ET-1過(guò)表達(dá)，減輕糖尿病小鼠主動(dòng)脈病變。
　　第三部分 內(nèi)皮素-1通路對(duì)小鼠糖尿病心臟病變的影響及分子機(jī)制
　　目的：探討內(nèi)皮素-1通路對(duì)小鼠糖尿病心臟病變的影響及內(nèi)皮素受體拮抗劑對(duì)糖尿病心臟病變的潛在保護(hù)作用。
　　方法：將30只6周齡雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(Control)、糖尿病對(duì)照組(DM)、糖

10、尿病藥物干預(yù)組(DM-B)，每組10只。鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射，連續(xù)5天以50mg/kg劑量建立糖尿病模型。對(duì)DM-B組小鼠給予內(nèi)皮素受體拮抗劑波生坦(100mg/kg)灌胃，Control組、DM組給予同等劑量生理鹽水灌胃，每日1次，連續(xù)24周。24周后進(jìn)行超聲心動(dòng)圖檢查，取心臟標(biāo)本，進(jìn)行心肌組織MASSON染色，ELISA法檢測(cè)小鼠心肌組織中VEGF、ET-1、TGF-β、MMP-2、MMP-9含量。
　　結(jié)果：與Con

11、trol組相比，DM組及DM-B組空腹血糖升高(P＜0.05)，DM組與DM-B組相比，空腹血糖水平接近(P＞0.05)。與Control組相比，DM組及DM-B組E/A比值升高(P＜0.05)。DM-B組的E/A比值較DM組減少(P＜0.05)。MASSON染色，Control組心肌組織禾見明顯的纖維化，DM組心肌組織可見大片纖維化改變，DM-B組較DM組纖維化程度明顯改善。ELISA測(cè)定心肌組織中ET-1、TGF-β、NF-kB、M

12、MP-2、MMP-9含量，與Control組相比，ET-1、TGF-β、NF-kB、MMP-2、MMP-9在DM組含量增加(P＜0.05)，DM-B組中ET-1、TGF-β、NF-kB、MMP-2、MMP-9含量較DM組降低(P＜0.05)。
　　小結(jié)：內(nèi)皮素受體拮抗劑波生坦阻斷ET-1通路，抑制ET-1過(guò)表達(dá)，減輕糖尿病小鼠心臟病變。
　　結(jié)論：糖尿病狀態(tài)下會(huì)導(dǎo)致ET-1過(guò)表達(dá)，從而進(jìn)一步導(dǎo)致VEGF、TNF-α、NF-k