神經(jīng)黏附分子CHL1在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤體內(nèi)和體外的功能研究.pdf

1、背景：神經(jīng)膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)性腦腫瘤，而對于膠質(zhì)瘤細(xì)胞的惡性發(fā)生和發(fā)展的機(jī)制尚不明確。研究表明，神經(jīng)細(xì)胞粘附分子Ll（cell adhesion molecular L1）在多種人類惡性腫瘤中表達(dá)異常,而神經(jīng)細(xì)胞黏附分子CHL1(close homologue of L1,CHL1)是通過克隆得到與神經(jīng)黏附分子L1具有高度同源的基因，具有類似的生物學(xué)功能。但CHL1在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的作用有待明確。
　　目的：探究神

2、經(jīng)黏附分子CHL1在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤體內(nèi)和體外的作用機(jī)制。
　　方法：本課題分為體外實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，將人正常腦膠質(zhì)細(xì)胞HEB和人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞、SHG44、U87-MG和 U251細(xì)胞系每種細(xì)胞均分成三組，即溶劑對照組（Vehicle Control,VC組），陰性對照（Control siRNA）與CHL1-homo-2405 siRNA實(shí)驗(yàn)組，通過EntransterTM-R介導(dǎo)siRNA靶向轉(zhuǎn)染上述細(xì)胞48h后，應(yīng)

3、用RT-PCR和western blot技術(shù)檢測了siRNA敲低CHL1的表達(dá)變化及相關(guān)信號通路的水平變化。使用細(xì)胞生長曲線、MTT、細(xì)胞平板克隆、細(xì)胞衰老、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)等方法分析轉(zhuǎn)染前后膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖活性和侵襲能力的變化。第二部分中則通過構(gòu)建膠質(zhì)瘤腫瘤模型，探究siRNA干擾U87-MG裸鼠膠質(zhì)瘤CHL1基因表達(dá)后該蛋白和相關(guān)凋亡蛋白質(zhì)的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：前者結(jié)果顯示，CHL1在正常腦膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)很少或者不表

4、達(dá)。RT-PCR和Western blot檢測結(jié)果顯示，CHL1 siRNA組細(xì)胞內(nèi)CHL1在mRNA水平和蛋白質(zhì)水平上的表達(dá)均受到明顯抑制(p<0.05)。MTT檢測結(jié)果顯示，CHL1 siRNA組中SHG44細(xì)胞增殖能力在轉(zhuǎn)染72h后出現(xiàn)明顯降低(p<0.05)；U87-MG和U251細(xì)胞增殖能力在轉(zhuǎn)染48h后即出現(xiàn)明顯降低。細(xì)胞平板克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CHL1 siRNA組細(xì)胞克隆形成數(shù)目均明顯減少(p<0.05)。細(xì)胞衰老實(shí)驗(yàn)

5、結(jié)果亦顯示，CHL1 siRNA組細(xì)胞衰老細(xì)胞染色數(shù)目均明顯增多(p<0.05)。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)證實(shí)，CHL1 siRNA組細(xì)胞侵襲能力均受到明顯抑制(p<0.05)。Western blot檢測ERK、AKT及凋亡相關(guān)蛋白信號結(jié)果顯示，CHL1 siRNA組細(xì)胞體內(nèi)ERK和AKT的磷酸化水平均出現(xiàn)下降(p<0.05)，增值細(xì)胞核抗原（PCNA）和抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表達(dá)量減少(p<0.05)，而促凋亡蛋白Bax和活性C

6、aspase-3蛋白表達(dá)量增加(p<0.05)。后者結(jié)果顯示，第二次注射后的第4天腫瘤體積增長差別最顯著(p<0.05)。免疫組化染色結(jié)果顯示，CHL1 siRNA治療組中腫瘤內(nèi)CHL1蛋白表達(dá)明顯低于Control siRNA對照組。CHL1 siRNA治療組腫瘤中活性Caspase-3蛋白表達(dá)明顯上升；而CHL1 siRNA治療組腫瘤中PCNA和GFAP蛋白質(zhì)表達(dá)均低于Control siRNA對照組。
　　結(jié)論：ERK和AK