從Notch信號通路探討長春新堿誘導神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生機制及天麻素的干預(yù)作用.pdf

1、目的：
　?。?）研究Notch信號通路的活化在長春新堿誘導的神經(jīng)病理性疼痛大鼠中的作用，探討活化的Notch信號通路是否通過促進脊髓小膠質(zhì)細胞CX3CR1信號通路活化誘導大鼠產(chǎn)生痛覺過敏反應(yīng)。
　?。?）基于活化的Notch信號通路對化療痛大鼠的影響，探討天麻素治療化療痛大鼠的作用機制。
　　方法：
　?。?）第一部分：研究Notch信號通路的活化對長春新堿誘導神經(jīng)病理性疼痛的調(diào)控作用。大鼠鞘內(nèi)置管并篩選出痛閾

2、值合格的SD大鼠40只，采用隨機配伍的方法分為4組：對照組、長春新堿致化療痛模型組、DAPT多次給藥+長春新堿致化療痛組、DAPT單次給藥+長春新堿致化療痛組。用隔日腹腔注射長春新堿（125μg/kg）的方法建立化療痛動物模型，Notch信號通路抑制劑DAPT從建立化療痛模型前1日起鞘內(nèi)注射（50μg/rat，1μL），其它各組同步注射生理鹽水。分別用Electronic vonfrey測痛儀、熱輻射測痛儀、冷板測痛儀測定大鼠機械痛閾值

3、、熱痛閾值及冷痛閾值，免疫組化法檢測Notch信號通路活化標志物NICD、小膠質(zhì)細胞特異性活化標志物Iba-1的表達，Western Blot法檢測脊髓NICD、CX3CR1蛋白、P-p38蛋白表達，RT-PCR法檢測Notch1 mRNA、Hes1 mRNA表達，ELISA法檢測TNF-α、IL-1β蛋白表達。
　?。?）第二部分：基于Notch信號通路探討天麻素對長春新堿誘導神經(jīng)病理性疼痛大鼠治療的作用機制。根據(jù)痛閾值大小篩選

4、出合格的SD大鼠40只，采用隨機配伍的方法分為4組：對照組、長春新堿致化療痛模型組、天麻素低劑量（60 mg/kg）+長春新堿致化療痛組、天麻素高劑量（120 mg/kg）+長春新堿致化療痛組。用隔日腹腔注射長春新堿（125μg/kg）的方法建立化療藥物誘導的神經(jīng)病理性疼痛動物模型，第9日采用不同劑量的天麻素治療化療痛大鼠，分別測定化療痛大鼠機械痛閾值、熱痛閾值及冷痛閾值，免疫組化法檢測Notch信號通路活化標志物NICD、小膠質(zhì)細胞特

5、異性活化標志物Iba-1的表達，Western Blot法檢測脊髓NICD、CX3CR1蛋白、P-p38蛋白表達，RT-PCR法檢測Notch1 mRNA、Hes1 mRNA表達，ELISA法檢測TNF-α、IL-1β蛋白表達。
　　結(jié)果：
　?。?）第一部分：研究Notch信號通路的活化對長春新堿誘導神經(jīng)病理性疼痛的調(diào)控作用。與對照組比較，長春新堿致化療痛模型組大鼠機械痛閾值、熱痛閾值、冷痛閾值和Notch1 mRNA表達

6、水平顯著降低，脊髓背角NICD、Iba-1蛋白、CX3CR1蛋白、P-p38蛋白、Hes1 mRNA和TNF-α、IL-1β蛋白表達顯著升高；與長春新堿致化療痛模型組比較，DAPT多次給藥+長春新堿致化療痛組、DAPT單次給藥+長春新堿致化療痛組大鼠機械痛閾值、熱痛閾值和冷痛閾值和Notch1 mRNA表達水平均升高，脊髓背角NICD、Iba-1蛋白、CX3CR1蛋白、P-p38蛋白、Hes1 mRNA和TNF-α、IL-1β蛋白表達顯

7、著降低。
　　（2）第二部分：基于Notch信號通路探討天麻素對長春新堿誘導神經(jīng)病理性疼痛大鼠治療的作用機制。與對照組比較，長春新堿致化療痛組大鼠機械痛閾值、熱痛閾值、冷痛閾值和Notch1 mRNA表達水平顯著降低，脊髓背角NICD、Iba-1蛋白、CX3CR1蛋白、P-p38蛋白、Hes1 mRNA和TNF-α、IL-1β蛋白表達顯著升高；與長春新堿致化療痛組比較，天麻素高低劑量+長春新堿致化療痛組大鼠機械痛閾值、熱痛閾值冷痛

8、閾值和Notch1 mRNA表達水平有不同程度的升高，脊髓背角NICD、Iba-1蛋白、CX3CR1蛋白、P-p38蛋白、Hes1 mRNA和TNF-α、IL-1β蛋白表達有不同程度的降低。
　　結(jié)論：
　?。?）Notch信號通路的活化可能參與了長春新堿誘導的神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生、發(fā)展，抑制Notch信號通路的活化可抑制大鼠脊髓背角小膠質(zhì)細胞CX3CR1信號通路的活化，緩解化療痛大鼠機械痛、熱痛、冷痛敏感反應(yīng)。