長(zhǎng)白山自然保護(hù)區(qū)土壤真菌彎頸霉屬真菌遺傳多樣性及分布規(guī)律研究.pdf

1、長(zhǎng)白山自然保護(hù)區(qū)是亞歐大陸保存較完整的生態(tài)系統(tǒng)，是研究物種多樣性的理想之地。2013年和2014年6、7、8和9月赴長(zhǎng)白山自然保護(hù)區(qū)北坡，依據(jù)不同森林類型和土壤類型采用“之”字形多點(diǎn)采樣法，在海拔800-2650m區(qū)域內(nèi)采集土壤樣品324份。以稀釋平板法和形態(tài)學(xué)鑒定法，共分離得到133株彎頸霉。
　　通過(guò)對(duì)彎頸霉屬(Tolypocladium)真菌在長(zhǎng)白山的生態(tài)分布分析，發(fā)現(xiàn)其種類與數(shù)量的分布特點(diǎn):從海拔1500-1800m逐漸增

2、加，從1800-2000m逐漸減少，從2000-2600m逐漸增加，在2600m以上沒(méi)有分離到;從6月至8月份離到的彎頸霉的數(shù)量逐漸下降，9月又有所回升，但是較7月份少。
　　對(duì)133株彎頸霉進(jìn)行了分子生物學(xué)鑒定及18S rDNA-ITS和延長(zhǎng)因子(elongationfactor1-α)的核酸序列對(duì)比分析。結(jié)果表明，利用18S rDNA-ITS序列所建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)與Blast結(jié)果并不一致;與18S rDNA-ITS序列分析相比，

3、依據(jù)延長(zhǎng)因子核酸序列所建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，其鑒定結(jié)果更準(zhǔn)確。
　　利用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)，對(duì)133株彎頸霉屬真菌進(jìn)行了遺傳多樣性分析。從40個(gè)通用引物中篩選出了10個(gè)穩(wěn)定性及多態(tài)性好的引物，鑒定結(jié)果表明，ISSR表現(xiàn)出很高的遺傳多態(tài)性，多態(tài)性條帶達(dá)到79％，且擴(kuò)增結(jié)果有很好的重復(fù)性;無(wú)論是海拔還是月份各居群間群體遺傳變異較小，這可能是由于彎頸霉生態(tài)適應(yīng)強(qiáng)，即海拔和采集時(shí)間（月份）對(duì)彎頸霉的遺傳變異并沒(méi)有明顯的影響。
　　通過(guò)對(duì)

4、三種彎頸霉（雪白彎頸霉、柱孢彎頸霉、地生彎頸霉）的生長(zhǎng)培養(yǎng)基、pH、光照、氮源和碳源等生物學(xué)特性的研究發(fā)現(xiàn)，在同一環(huán)境下，最適光照條件為光暗交替(12h)，最適合培養(yǎng)基為PDA，孢子萌發(fā)的最適碳源為葡萄糖，最適氮源為硫酸銨;三者不同的是:三種彎頸霉中，雪白彎頸霉(Tolypocladium niveum)的長(zhǎng)勢(shì)始終最好，產(chǎn)孢量也總體偏高。雪白彎頸霉的最適培養(yǎng)基為PDA，最適溫度為25℃，對(duì)酸度不敏感，當(dāng)pH為7時(shí)，產(chǎn)孢量最大。其菌落生長(zhǎng)