玻璃抗菌性能試驗(yàn)方法

1、DB35/T 2089—2022 7 附 錄 A （規(guī)范性） 抗菌性能試驗(yàn)方法 A.1 試驗(yàn)原理 通過定量接種細(xì)菌于待檢驗(yàn)樣片上， 經(jīng)過一定時(shí)間的培養(yǎng)后， 檢測(cè)樣片中的菌落數(shù)， 并計(jì)算出樣片的抗菌活性值，抗菌活性值為2.0以上判定為具有抗菌效果。 A.2 條件 A.2.1 主要設(shè)備 A.2.1.1 恒溫恒濕培養(yǎng)箱、冷藏箱、生物安全柜、生物光學(xué)顯微鏡、壓力蒸汽滅菌器、干熱殺菌器。 A.2.1.2 滅菌平皿、滅菌試管、移液管、接種環(huán)、酒精

2、燈、滅菌鑷子。 A.2.2 主要材料 A.2.2.1 薄膜 聚乙烯薄膜，尺寸為（40 mm±2 mm）×（40 mm±2 mm），厚度為0.05 mm～0.10 mm，用75%乙醇溶液浸泡后，再用滅菌水沖洗，自然干燥。 A.2.2.2 培養(yǎng)基 A.2.2.2.1 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（NB） 蛋白胨 10.0 g 牛肉膏粉 3.0 g 氯化鈉 5.0 g 制法：將上述成分加入

3、1 000 mL去離子水中混合，待全部溶解后，再用去離子水稀釋100倍或500倍后， 用NaOH溶液或HCl溶液調(diào)整pH為6.8～7.2 （25 ℃） ， 分裝后于壓力蒸汽滅菌器內(nèi)121 ℃滅菌15 min。 A.2.2.2.2 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（NA） 蛋白胨 10.0 g 牛肉膏粉 3.0 g 氯化鈉 5.0 g 瓊脂 15.0 g 制法：將上述成分加入1 000 mL去離子水中

4、混合，待全部溶解后，用NaOH溶液或HCl溶液調(diào)整pH為7.0～7.2（25 ℃），加熱溶解，分裝后于壓力蒸汽滅菌器內(nèi)121 ℃滅菌15 min。 A.2.2.2.3 斜面培養(yǎng)基（NA） 取10 mL～20 mL溶解后的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基注入不同規(guī)格試管內(nèi)，塞上棉塞，于壓力蒸汽滅菌器內(nèi)121 ℃滅菌15 min。滅菌完成后，將試管保持15 °傾斜放置，讓管內(nèi)物質(zhì)凝固。 A.2.2.2.4 SCDLP 液體培養(yǎng)基 DB35/T 20

5、89—2022 9 A.2.3.1.2 高壓滅菌鍋 將滅菌對(duì)象放入高壓滅菌器，加熱至121 ℃（壓力103 kPa）后保持15 min～30 min。停止加熱，自然冷卻至100 ℃以下，取出滅菌后的物品。 A.2.3.1.3 火焰滅菌 將需要滅菌的物體放至火焰中，接種環(huán)應(yīng)加熱到變紅，試管應(yīng)接觸火焰2 s～3 s。 A.2.3.2 器具滅菌 試管、吸管等玻璃試驗(yàn)器具，呈堿性狀態(tài)時(shí)用中性試劑沖洗，再用去離子水充分洗凈，待干燥后進(jìn)行干熱滅菌或

6、高壓滅菌鍋滅菌處理。接種環(huán)需火焰滅菌后使用。 A.2.4 試驗(yàn)菌種 試驗(yàn)菌種包括： a) 大腸埃希氏菌（Escherichia coli）AS1.90； b) 金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）AS1.89。 根據(jù)產(chǎn)品的使用要求，所用菌種應(yīng)由國家相應(yīng)菌種保藏管理中心提供并可溯源。 A.2.5 樣片 A.2.5.1 空白對(duì)照樣片 未進(jìn)行抗菌處理的普通玻璃樣片。 A.2.5.2 抗菌玻璃試驗(yàn)樣片 已進(jìn)行抗菌處理的玻

7、璃樣片。 A.2.5.3 試驗(yàn)樣片的準(zhǔn)備 選擇水平玻璃片 （非水平玻璃片可以采用相同的加工工藝方法制成水平玻璃片） ， 將無抗菌加工的試驗(yàn)樣片和經(jīng)抗菌加工的試驗(yàn)樣片裁成（50 mm±2 mm）×（50 mm±2 mm）大小。準(zhǔn)備6片無抗菌加工的試驗(yàn)樣片，其中3片接種后立即檢測(cè)菌落數(shù)值，另外3片接種24 h后計(jì)算菌落數(shù)值。試驗(yàn)前將試驗(yàn)樣片進(jìn)行消毒，先用去離子水清洗，然后用75%乙醇溶液擦拭試驗(yàn)樣片，最后用無菌

8、水沖洗干燥，備用。 A.3 操作步驟 A.3.1 菌種保藏 將菌種接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（NA）斜面，轉(zhuǎn)接的菌種在35 ℃±1 ℃接種培養(yǎng)24 h～48 h后，保藏在5 ℃～10 ℃溫度下，轉(zhuǎn)接時(shí)間不超過一個(gè)月，菌種傳代次數(shù)不應(yīng)超過5次。 A.3.2 菌種活化 將斜面保藏菌轉(zhuǎn)接到平板營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，在35 ℃±1 ℃培養(yǎng)18 h～20 h，每天轉(zhuǎn)接1次，不超過2周，試驗(yàn)時(shí)試驗(yàn)菌應(yīng)采用24 h內(nèi)連續(xù)轉(zhuǎn)接2次的新鮮菌種。