可見光分光光度計的操作方法

1、可見光分光光度計的操作方法 可見光分光光度計的操作方法學時： 學時：2 學時 學時一、實驗原理 一、實驗原理利用可見光等測定物質(zhì)的吸收光譜，利用此光譜對物質(zhì)進行定性定量分析和物質(zhì)結構分析的方法，稱為分光光度法，使用的儀器是分光光度計。分光光度計靈敏度高，測定速度快，應用范圍廣，是生物化學研究中必不可少的基本手段之一。可見光光譜：光是電磁波，可用波長“λ”表示，電磁波譜是由不同性質(zhì)的連續(xù)波長的光譜所組成，對于生物化學來說，最重要的波長區(qū)域

2、是可見光和紫外光。光的波長是二個相鄰的波峰之間的距離。λ=C/V 其中，λ-波長；C-光速；V-頻率；單位時間要通過一個定點的波數(shù)?？梢娢展庾V是由于分子中的某些基團吸收了可見輻射光后，發(fā)生了電子能級躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。它是帶狀光譜，反映了分子中某些基團的信息?？梢杂脴藴使鈭D譜再結合其它手段進行定性分析。根據(jù)朗伯-比爾（Lambert- Beer）定律：A=εbc，（A 為吸光度，ε 為摩爾吸光系數(shù)，b 為液池厚度，c 為溶液濃度

3、）可以對溶液進行定量分析。ε 越大，吸收光的能力越強，相應的分光光度法測定的靈敏度就越高。ε 值越大，說明電子躍遷的幾率越大，通常 ε=10～105：一般認為 ε>104 為強吸收；ε=103～104 為較強吸收；ε<102 為弱吸收，此時分光光度法不靈敏。通常使用分光光度計可檢測出的最小吸收度 A=0.001，所以 b=1cm，ε=105 時，可檢測的溶液最小濃度是C=10-8mol/L。二、分光光度計的基本參數(shù)和組成與構

4、造 二、分光光度計的基本參數(shù)和組成與構造1. 722S 可見光分光光度計的基本參數(shù)波長范圍：340-1000nm波長精度：±2nm（360-600nm）表面刻度：（T）0-100%（A）0-22. 組成與結構各種型號的分光光度計不論是何種型式，基本上都是由五部分組成：用標準曲線法對物質(zhì)定量 用標準曲線法對物質(zhì)定量取已知含量的標準樣品按樣品各自的分析規(guī)定制備樣品溶液及背景溶液設波長，置空白，條；調(diào)零，置“吸光度” ，讀出樣品吸光

5、度重復上述讀出各標準溶液的吸光度繪制已知含量及讀得吸光度繪制坐標圖并畫出最佳曲線讀未知樣品的吸光度，在曲線表上找出對應的濃度直接使用濃度直讀功能 直接使用濃度直讀功能直接使用濃度因子功能 直接使用濃度因子功能五、注意事項： 五、注意事項：1、儀器在運行中禁止將樣品池蓋長時間蓋上，以防光電管疲勞；2、使用時必須把比色皿外面的液體用濾紙吸干，方可放入樣品池架內(nèi)；3 、儀器使用完后，必須關閉電源，并將比色皿用高純水沖洗干凈，將外部的水用濾紙吸