elisa試驗總論

1、酶聯(lián)免疫吸附試驗及其應(yīng)用1一、 一、前 言近二十幾年來，免疫學分析方法發(fā)展很快，特別是在使用標記了的抗原和抗體的分析技術(shù)以后，使原來許多經(jīng)典的分析方法在敏感性和特異性方面都不能相比。繼 50年代的免疫熒光（IFA）和 60 年代的放射免疫(RIA)分析技術(shù)之后，在 70 年代初期又建立了用酶來標記抗原或抗體的分析技術(shù)。由于酶的高效生物催化作用，一個酶分子在數(shù)分鐘內(nèi)可以催化幾十幾百個底物分子發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生了放大作用，使得原來極其微乎其微

2、的抗原或抗體在數(shù)分鐘后就可被識別出來，這種技術(shù)被稱為酶聯(lián)免疫吸附試驗法（Enzyme—Linked Immunosorbent Assay，ELISA），本法自 70 年代初期由 VAN WEEMEN、SCHUARS.ENGVALL 及 PERLMARN 等相繼分別報道后，現(xiàn)已引起廣泛重視。ELISA 法是免疫診斷中的一項新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原

3、和小分子抗原的定量測定，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果，認為 ELISA 法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標本,因此，也適合于血清流行病學調(diào)查。本法不僅可以用來測定抗體，而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此 ELISA 法在生物醫(yī)學各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴大，可概括四個方面：1、免疫酶染色各種細胞內(nèi)成份的定位。2、研究抗酶抗體的

4、合成。3、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。4、定量檢測體液中抗原或抗體成份。酶聯(lián)免疫吸附試驗及其應(yīng)用3圖 1：竟爭法測抗原示意圖2、雙抗體夾心法 方法的基本原理可用圖 2 來表示圖 2.雙抗體夾心法測抗原示意圖本法首先也是用特異性抗體包被于固相載體，經(jīng)洗滌后加入含有抗原之待測樣品，如待檢樣品中有相應(yīng)抗原存在，即可與包被于固相載體上的特異性抗體結(jié)合，經(jīng)保溫孵育洗滌后，即可加入酶標記特異性抗體，再經(jīng)孵育洗滌后，加底物顯色進行測定，底物降解的量即為欲

5、測抗原的量。這種方法欲測的抗原必須有兩個可以與抗體結(jié)合的部位，因為其一端要包被于固相載體上的抗體作用，而另一端則要與酶標記特異性抗體作用。因此，不能用于分子量小于 5000 的半抗原之類的抗原測定。我們用在霍亂腸毒素的測定。HbSAg 及 HbS 的測定。3、改良雙抗體夾心法：本法是雙抗體夾心法的一種改良形式，也是用于測定抗原的，其原理可用圖 3 來表示。圖 3.改良雙抗體夾心法測抗原示意圖本法首先是將特異性抗體 a 包被于固相載體，經(jīng)

6、洗滌加入含有欲測抗原之待檢樣品。經(jīng)孵育洗滌后再加一次未標記的特異性抗體 b，而這次加入的抗體 b 于第一次包被于固相載體上的特異性抗體 a 對被測抗原來說都是特異性的，但不是用同種動物免疫制備的，否則可出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。經(jīng)孵育洗滌后，再加酶標記抗 b 抗體，再經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色進行測定。這種方法與雙抗體夾心法不同之處是多加了一層抗體。因此，放大的倍數(shù)更高，故比雙抗體夾心法更加靈敏。同時避免標記特異性抗體，而另一優(yōu)點是只要標記一種抗抗