外文翻譯--海洋沉積物中產(chǎn)生的l-谷氨酰胺酶的選擇性分離和分子鑒定(中文）

1、中文 中文 3483 字海洋沉積物中產(chǎn)生的 海洋沉積物中產(chǎn)生的 L- L-谷氨酰胺酶的選擇性分離和分子鑒定 谷氨酰胺酶的選擇性分離和分子鑒定Kiruthika J. 和 Saraswathy N.1.政府科技學(xué)院，哥印拜陀-641013 ，泰米爾納德邦，印度2.庫瑪拉格魯科技學(xué)院，哥印拜陀-641049，泰米爾納德邦，印度出處： 出處：Research Journal of Biotechnology Vol. 8 (8) August

2、 (2013)摘要： 摘要：L-谷氨酰胺酶（L-谷氨酰胺水解酶 E.C.3.5.1.2）是一種催化 L-谷氨酰胺裂解成 L-谷氨酸和氨的酶。由于其潛在的應(yīng)用作為抗癌和風(fēng)味增強劑，它已經(jīng)得到了重視。為了分離出一株有生產(chǎn)潛力的 L-谷氨酰胺酶菌株，印度喀拉拉邦和泰米爾納德邦不同河岸的土壤樣品被收集起來。幾株菌種中，基于酶的活性，一株有效的分離菌被選擇和確定了下來。形態(tài)學(xué)和生化特征顯示，有效的分離菌屬于弧菌屬。此外，有效菌株的 16s rRN

3、A 基因（1.4Kbp）被擴增，分析表明大約有 99%的相似性弧菌。IMSF-06（NCBI登錄號 GQ907023）和下一個同源性弧菌是 Azureus；HNS029（NCBI 登錄號JN128263）。因此，該菌株最終鑒定為弧菌 Azureus JK 79 菌株（GenBank 登錄號JQ820323）。關(guān)鍵詞： 關(guān)鍵詞：L-谷氨酰胺酶，分離，鑒定，16s rDNA 序列分析，弧菌 Azureus JK 79。引言 引言L-谷氨酰胺

4、酶（L-谷氨酰胺水解酶 E.C. 3.5.1.2）催化谷氨酰胺水解成 L-谷氨酸和氨。它是各種含氮代謝中間體合成的關(guān)鍵酶。L-谷氨酰胺酶是由不同的細菌，真菌，酵母，霉菌和絲狀真菌合成的。這種酶參與微生物的谷氨酰胺代謝。哺乳動物也合成這種參與到以谷氨酰胺為主要呼吸燃料產(chǎn)生能量的酶。因此，許多類型的腫瘤細胞以及積極分裂的正常細胞表現(xiàn)出對谷氨酰胺高幾率的利用。L- L-谷氨酰胺酶的分離富集與篩選： 谷氨酰胺酶的分離富集與篩選：一克土壤樣品懸浮

5、在100毫升的水，讓它在孵化器和振動混合井（100轉(zhuǎn)，37℃）對土壤沉積物完全混合30分鐘。約1毫升的上清液稀釋在無菌海水和0.1毫升鋪在最小的谷氨酰胺瓊脂（MGA）培養(yǎng)基上面。MGA 的成分（克／升）包括0.5的氯化鉀；0.5硫酸鎂；1磷酸二氫鉀；0.1硫酸亞鐵；0.1硫酸鋅；10的谷氨酰胺，0.12苯酚紅與放線菌酮（20µ 克/毫升）。L-谷氨酰胺作為唯一的碳源和氮源，酚紅作為 pH 指示劑和抗生素的放線菌酮抑制真菌生長。

6、平板在37℃下培育48小時。只有合成 L-谷氨酰胺酶的細菌能生長在 MGA 培養(yǎng)基上，細胞外產(chǎn)生的 L-谷氨酰胺酶在粉色菌落周圍形成區(qū)被發(fā)現(xiàn)。單菌落被選擇并且培育在谷氨酰胺瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)。目前工作中的所有培養(yǎng)基都和含有3‰鹽的海水混合制備了。十七種形態(tài)不同的菌株被選擇并且 L-谷氨酰胺酶活性被測定。酶的測定： 酶的測定：對17種菌株，通過 Imada et al 方法測定 L-谷氨酰胺酶的活性。不同菌株在37℃和180轉(zhuǎn)下培養(yǎng)24小時然后

7、放在10000轉(zhuǎn)離心機上離心20分鐘，取上清液用于酶測定。0.5毫升的樣品和0.5毫升0.4M 的 L-谷氨酰胺溶液等分混合在0.5毫升蒸餾水和0.5毫升的磷酸緩沖液中。該混合物在37℃下反應(yīng)30分鐘，反應(yīng)完后加入0.5毫升1.5M 的三氯乙酸。0.1毫升混合物中，加入3.7毫升蒸餾水和0.2毫升的內(nèi)斯勒氏試劑。吸光度測量在450nm 處用紫外可見分光光度計。釋放的氨含量的測定和一個國際單位的 L-谷氨酰胺酶被定義為在最佳條件下釋放1微

8、摩爾氨所需要的酶量。酶的產(chǎn)率表示為單位/毫升（U /毫升）。表型和生化鑒定： 表型和生化鑒定：形態(tài)分析，如紋理，顏色和強有力的設(shè)計邊緣被確定。生化特性試驗是根據(jù)伯杰系統(tǒng)細菌學(xué)手冊進行的。分離株的分子特征： 分離株的分子特征：基因組的 DNA 通過使用鉻的基因組 DNA 提取試劑盒（RKT09)從培養(yǎng)的 Est 1菌株中被分離并且步驟是根據(jù)制造協(xié)議進行的.引物16s FP 5'-AGAGTRTGATCMTYGCTWAC-3'