外文翻譯---在酪干乳桿菌bl23的ldh基因分析乳酸生產(chǎn)上的作用

1、英語外文翻 外文翻譯作業(yè)外文 外文資料翻 料翻譯譯 譯譯文： 文：在酪干乳桿菌 BL23 的 LDH 基因分析：乳酸生產(chǎn)上的作用Juan Rico · María Jesús Yebra ·Gaspar Pérez-Martínez · Josef Deutscher ·Vicente Monedero收稿日期：2007 年 12 月 21 日/接受日期：2

2、008 年 1 月 13 日/發(fā)表時間：2008年 1 月 30 日 ©學(xué)會工業(yè)微生物 2008摘要： 摘要：干酪乳桿菌是一種通過通過 L-乳酸脫氫酶（LDH1）的作用促使糖發(fā)酵主要生產(chǎn)L-乳酸的乳酸菌。此外，D-乳酸的異構(gòu)體的少量產(chǎn)生一個 D-hydroxycaproate 脫氫酶（HicD）的活動。LDH1 是主要的 L-乳酸生產(chǎn)酶，但突變它的基因并沒有消除 L-乳酸的合成。一項稱作 “干酪乳桿菌基本法第二十三條草案的基

3、因組序列”的調(diào)查揭示了相關(guān)的另外三個基因編碼乳酸脫氫酶旁系。為了研究這些基因?qū)θ虻倪@種微生物的貢獻(xiàn)，個體乳酸以及雙突變體（LDH1 LDH2，LDH1 LDH3，LDH1，LDH4 和 LDH1hicD）的生產(chǎn)，構(gòu)建了乳酸生產(chǎn)的上清培養(yǎng)評估。 LDH2，LDH3 和 LDH4 基因乳酸生產(chǎn)中發(fā)揮的作用不大，因為他們的單一突變或在組合與 LDH1 缺失突變對 L-乳酸合成的影響很小。ΔLDH1 突變體顯示 D-乳酸產(chǎn)量增加，這是可能通過

4、活動 HicD 合成，因為它是在取消ΔLDH1 hicD 的雙突變。相反，可能是 HicD，在沒有 LDH1，LDH2，LDH3 或 LDH4活動的情況下通過酶譜分析檢測。此外，這些檢測發(fā)現(xiàn)存在額外的頻段表現(xiàn)出 D-/L-lactate 脫氫酶活性，這不能歸咎于任何所描述的基因。這些結(jié)果表明，L-BL23 具有一個復(fù)雜的酶系統(tǒng)，能夠減少乳酸丙酮酸。關(guān)鍵詞： 關(guān)鍵詞：干酪乳桿菌、乳酸菌、Hydroxycaproate 脫氫酶、乳酸脫氫酶、

5、代謝工程簡介： 簡介：糖代謝乳酸菌（LAB）的特點是通過乳酸脫氫酶的作用主要發(fā)酵生產(chǎn)乳酸產(chǎn)品，從而降低丙酮酸，乳酸。從生物技術(shù)的觀點來看乳酸的生產(chǎn)是非常重要的，因為它可以產(chǎn)生許多自然發(fā)酵的實驗室資源，它可以用在食品，制藥和生物聚合物產(chǎn)業(yè)[7]。在乳酸菌干酪 BL23，一些菌株已被廣泛用于遺傳，生理和生化研究，這兩個基因編碼的蛋白質(zhì)乳酸脫氫酶活性已被描述[8，12，19]。 LDH1 基因編碼合成的 L-LDH，而 hicD 編碼個 5

6、19 bp 的片段從 LDH2 ampliWed PCR 結(jié)合寡核苷酸 5ˊ-GATTCCCTACCTTACACG 和 5ˊ-TCTCAATGATGCCATAAGC 與 EcoRV 分為 pRV300 消化的克隆，給予 pRVldh2。一 505 bp 的LDH3 內(nèi)部片段是與 5ˊ-GTG ampliWed TTATTTCCGCGGTC 和 5ˊ-GCTTAGCCTGATAAA 與SMAI 消化 TCTTC 和克隆到 pRV3

7、00 給 pRVldh3。 LDH4 的 437 bp 的片段，ampliWed 5ˊ-TCTCAATTCAGCGATGGC 和 5ˊ-CTACATCATCAGATGCG 和克隆到 EcoRV 消化 pRV300 來給pRVldh4。要構(gòu)建的 PRV ΔLDH1 質(zhì)粒攜帶融合 5ˊ和 3ˊ的 LDH1 區(qū)域，500 bp 的片段相應(yīng) LDH13ˊ下游地區(qū)與寡核苷酸 5ˊ-CGACACCGAGA ampliWed ATTTCTG

8、TG 和 5ˊ-ACATGGATGGTCAATATGGC 并克隆到 pRV300 用 EcoRI 消化（作出鈍的 Klenow DNApolI 的片段） 。另外有 500 bp 的 5ˊLDH1 在上游區(qū)域與寡核苷酸 ampliWed 5ˊ-CGGGGTACCGTCGTTTGGCCAAGCCATC 和 5ˊ-TTCAAGCAAGCTTCCAATAAC 并克隆到上述質(zhì)粒 PSTI（消化鈍與 Klenow 酶

9、） 。克隆含有質(zhì)粒與導(dǎo)致在正確的方向碎片被identiWed 限制分析，并命名為 PRVΔLDH1。 PCR 的進行與展開高精度聚合酶（Roche）從桿菌屬 BL23 染色體 DNA。 PCR 產(chǎn)物凝膠 puriWed 的 gfx-PCR puriWcation試劑盒（GE 醫(yī)療機構(gòu)） 。限制性內(nèi)切酶，DNA 的 modiWcation 酶和 T4 連接酶為 New England Biolabs 公司和 Roche 公司生產(chǎn)。干

10、酪乳桿菌菌株的轉(zhuǎn)化 干酪乳桿菌菌株的轉(zhuǎn)化pRVldh2，pRVldh3，pRVldh4 和 pVBhic[19]通過 GenePulser 儀（BioRad 公司）和 MRS 平板轉(zhuǎn)化紅霉素。通過與相應(yīng)的寡核苷酸和 DNA 聚合酶鏈反應(yīng)轉(zhuǎn)化在正確的位點整合測試。構(gòu)建 LDH1 缺陷菌株，干酪乳桿菌 BL23 通過克隆選擇轉(zhuǎn)化為 PRVΔLDH1和耐紅霉素。一些克隆體在含有紅霉素的 MRS 培養(yǎng)基上生長約 200 代沒有產(chǎn)生抗生素，稀釋過

11、后培養(yǎng)的菌種亦是如此。 BL249（ΔLDH1）被選定為第二應(yīng)變基因重組導(dǎo)致質(zhì)粒切除留下缺失性的 LDH1，經(jīng) PCR conWrmed 執(zhí)行從敏感紅霉素克隆的 DNA 的分離。有機酸和葡萄糖的測定 有機酸和葡萄糖的測定干酪乳桿菌細(xì)胞培養(yǎng)初期在輔以 0.2％葡萄糖的 MRS 培養(yǎng)基上培養(yǎng)。有機酸上清液用 JASCO PU-2080Plus HPLC 系統(tǒng)，耦合紫外檢測器（210 nm） ，以及使用 Rezex ROAOrganic 色譜