蠟梅(chimonanthuspraecox(l.)link)幾丁質(zhì)酶基因cpchia的克隆及原核表達(dá)產(chǎn)物特性分析

1、西南大學(xué)碩士學(xué)位論文蠟梅（Chimonanthus praecox（L.）Link）幾丁質(zhì)酶基因Cpchia的克隆及原核表達(dá)產(chǎn)物特性分析姓名：謝樹章申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：花卉學(xué)指導(dǎo)教師：李名揚(yáng)20090501西南大學(xué)碩士學(xué)位論文1 1 - - L , I ． J , 量曼曼曼曼! 寡曼曼曼皇曼曼皇曼曼皇曼曼曼曼曼蔓曼曼曼曼曼皇! 曼的信號肽序列。C p c h i a 蛋白二級結(jié)構(gòu)主要由C t 螺旋( h e l i x ，6 5 ．

2、2 9 ％) 、少量的延伸鏈( e x t e n ds t r a n d ，5 ．3 6 ％) 和隨機(jī)結(jié)構(gòu)( 1 0 0 p s ／o t h e r ，2 9 ．3 3 ％) 組成。同時(shí)該編碼蛋白含有多個(gè)磷酸化位點(diǎn)，推測翻譯后蛋白可能進(jìn)行多樣化修飾，這與幾丁質(zhì)酶多抗性特性相關(guān)。3 ．C p c h i a 基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建與原核表達(dá)體系的優(yōu)化通過切除信號肽序列并將蠟梅幾丁質(zhì)酶基因構(gòu)建到原核表達(dá)載體p E T - 2 8 a

3、( + ) 中，轉(zhuǎn)化宿主大腸桿菌B L 2 1 誘導(dǎo)表達(dá)，獲得了重組蛋白。從誘導(dǎo)溫度、I P T G 終濃度和誘導(dǎo)表達(dá)時(shí)間三個(gè)方面優(yōu)化重組蛋白的表達(dá)體系，經(jīng)S D S - P A G E 電泳確認(rèn)該重組蛋白以包涵體的形式存在。在本實(shí)驗(yàn)中，通過降低誘導(dǎo)溫度可降低目的蛋白的表達(dá)量，但同時(shí)并不會(huì)促使產(chǎn)生可溶性目的蛋白。4 ．原核表達(dá)產(chǎn)物的純化復(fù)性及特性分析分離純化采用溶菌酶破碎細(xì)菌的細(xì)胞膜，再結(jié)合超聲破碎方法，可顯著提高了包涵體的純度和回收率