漢坦病毒分子流行病學研究及l(fā)p.ompm基因的克隆表達

1、四川大學碩士學位論文漢坦病毒分子流行病學研究及LP.ompM基因的克隆表達姓名：蘆殿香申請學位級別：碩士專業(yè)：病原生物學指導教師：陳建平20050501四川大學碩士學位論文 漢坦病毒分子流行病學研究及L P ．o m p M 基因的克隆表達嗜肺軍團菌是一種革蘭染色陰性，選擇} 生胞內(nèi)寄生的細菌。人類感染嗜肺軍團菌可引起肺部疾病，以P o n t i a c 熱和非典型肺炎癥狀為主。軍團菌可在多種細胞內(nèi)復制，但在人類以寄生于肺泡巨噬細胞為

2、主。已有關(guān)于軍團菌外膜蛋白成分是否作為細菌胞內(nèi)寄生及致病的關(guān)鍵性因素的研究，并且已發(fā)現(xiàn)了部分對軍團菌胞內(nèi)寄生：逃避宿主抗原遞呈途徑及殺滅宿主細胞起重要作用的軍團菌的基因2 州。雖然關(guān)于嗜肺軍團菌及其它軍團菌屬的外膜蛋白是否存在共性的報道觀點不一，但一些血清型別的嗜肺軍團菌確實含有分子量在2 5 k D a - 2 9k D a 的外膜蛋白成份。據(jù)K r i o n s 報道，把編碼嗜肺軍團菌2 5 k D a 主要外膜蛋白的基因轉(zhuǎn)入大腸

3、桿菌J M 8 3 ，表達的蛋白可使非調(diào)理素依賴的對U ．9 3 7 細胞的粘附作用較對比組增加5 倍以上，應(yīng)用主要外膜蛋白特異的單克隆抗體可阻斷此粘附作用，故認為軍團菌2 5 K D a 的主要外膜蛋白( M O M P ) 作為一種粘附因子可介導軍團菌粘附到宿主細胞，與軍團菌的毒力緊密相關(guān)。因此，我們選擇編碼主要外膜蛋白的基因作為研究對象，希望能為研究主要外膜蛋白基因的結(jié)構(gòu)，功能及研制軍團菌基因工程疫苗奠定理論基礎(chǔ)。本研究分為兩部分

4、進行第一部分：以5 8 8 份捕獲于吉林省不同地區(qū)的褐家鼠鼠肺材料作為研究對象，利用贏接免疫熒光法篩選其中的陽性鼠肺，分析吉林省褐家鼠的漢坦病毒帶毒率；并用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)( R T —M R ) 擴增8 份吉林省褐家鼠中具有地域代表性的陽性鼠肺漢坦病毒的M 和s 基因片段，將其與我國及其他國家具有代表性毒株相應(yīng)的基因片段進行序列對比構(gòu)建吉林省褐家鼠的分子進化樹。第二部分：用P C R 技術(shù)擴增嗜肺軍團菌的主要外膜蛋白抗原基因o m