人參強(qiáng)心滴丸對(duì)阿霉素心衰大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：人參強(qiáng)心滴丸(由人參、生地黃、蟾酥等藥物組成)具有益氣養(yǎng)陰，活血強(qiáng)心功效，為導(dǎo)師經(jīng)臨床觀察篩選的效方，對(duì)充血性心力衰竭具有較好的治療效果，為了進(jìn)一步探討其作用機(jī)理，參照相關(guān)文獻(xiàn)運(yùn)用阿霉素復(fù)制心力衰竭大鼠模型，同時(shí)施加藥物干預(yù)，觀察了其對(duì)心衰大鼠心功能和心肌細(xì)胞凋亡及相關(guān)調(diào)控基因的影響，探討了其增強(qiáng)心功能和抗心肌細(xì)胞凋亡、保護(hù)心肌細(xì)胞的作用機(jī)制，并運(yùn)用HE染色方法觀察了本方對(duì)心肌組織形態(tài)學(xué)的影響。 方法：選用Wister大鼠

2、50只，體重160～180g，雌雄各半。大鼠自由飲水進(jìn)食，飼養(yǎng)于18℃～22℃明暗各12小時(shí)的清潔級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。正常喂養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為5組：空白對(duì)照組(normal control；group，N)、模型對(duì)照組(modelgroup，M)、人參強(qiáng)心滴丸高劑量組(high-doserenshenqiangxindiwan group，H)、人參強(qiáng)心滴丸低劑量組(low-dose renshenqiangxindiwan group，L

3、)、陽性藥(心寶丸)(xiTtbaowan control groulD，X)對(duì)照組。除空白對(duì)照組外，其它各組邊造模邊進(jìn)行治療，各組1次/d灌胃，每次用藥體積均按1ml/100g計(jì)算。參照相關(guān)文獻(xiàn)，模型對(duì)照組大鼠腹腔注射鹽酸阿霉素，按2mg/kg劑量溶于1ml生理鹽水，每周一次，共注射六次，人參強(qiáng)心滴丸高、低劑量組以及陽性藥對(duì)照組大鼠阿霉素給法同模型組，并用相應(yīng)藥物灌胃治療，每天一次，共灌胃六周。正常對(duì)照組大鼠腹腔注射1ml生理鹽水，每

4、周一次，共注射六次。實(shí)驗(yàn)6周末，于最后一次給藥禁食12h后用10％水合氯醛腹腔注射麻醉，行氣管插管，人工呼吸(潮氣量5ml，頻率10次/min)，分離右頸總動(dòng)脈及開胸分離升主動(dòng)脈，0．3％肝素(2mg/kg)尾靜脈注射，肝素化后右頸總動(dòng)脈插管記錄血壓，心尖部插管記錄左心室內(nèi)壓，主動(dòng)脈根部安置2號(hào)電磁流量計(jì)探頭，經(jīng)ME-27型電磁流量計(jì)測(cè)量主動(dòng)脈血流量，用PM-6000型八導(dǎo)生理儀記錄心率(HR)、收縮壓(ABP)、舒張壓(ADP)、每搏

5、流量(SV)、左室收縮內(nèi)壓(LVSP)、左室內(nèi)壓最大變化速率(±dp/dt<,max>)和心輸出量(CO)。在心尖部取綠豆粒大小的組織，生理鹽水洗凈血液，濾紙吸干水分，70％乙醇溶液固定，4℃冰箱冷貯待檢，采用美國(guó)Beckman Cotllter公司生產(chǎn)的Epics-XL Ⅱ型流式細(xì)胞儀，應(yīng)用Expo32ADC進(jìn)行免疫熒光數(shù)據(jù)分析，用MuticycleAV分析軟件對(duì)DNA細(xì)胞周期擬合分析。并留取心肌組織，HE染色，光鏡下觀察心肌組織形態(tài)

6、學(xué)變化。 結(jié)果： 1、一般行為觀察實(shí)驗(yàn)期間，空白組生長(zhǎng)良好，飲食正常，反應(yīng)靈敏。模型組大鼠逐漸出現(xiàn)皮毛凌亂，色枯無澤，甚有少量脫落，形體消瘦，蜷臥扎堆，活動(dòng)減少，精神萎靡，尿液減少，食欲下降，水腫，爪甲紫紺等癥狀和體征。高劑量組、低劑量組和心寶丸組大鼠情況均較模型組為輕。 2、人參強(qiáng)心滴丸對(duì)心力衰竭大鼠心肌組織形態(tài)學(xué)的影響結(jié)果顯示，空白組心肌細(xì)胞紋理清晰，走形正常，胞漿著色均勻，間質(zhì)細(xì)胞無增生，間質(zhì)無擴(kuò)張充血。模

7、型組心肌纖維著色不均，部分心肌呈典型顆粒樣變性表現(xiàn)為胞漿淺染，可見漿內(nèi)充滿細(xì)小粉紅染顆粒，紋理消失，間質(zhì)輕度水腫，灶性間質(zhì)細(xì)胞增生，部分可見灶性心肌纖維走形中斷，心肌細(xì)胞核萎縮，染色變深。高劑量組、低劑量組、心寶丸組心肌損害均較模型組減輕，心肌纖維有輕度顆粒樣變性，間質(zhì)無明顯充血。 3、人參強(qiáng)心滴丸對(duì)心衰大鼠心功能的影響模型組大鼠心臟收縮及舒張功能明顯障礙，CO較正常組減少(p<0.05)，LVSP和+dp/dt<,max>較

8、正常組明顯降低(p<0.05或p<0.01)，經(jīng)藥物治療后，各治療組CO增加(p<0.05或p<0.01)，LVSP和+dp/dtmaX上升(p<0.05或p<0.01)，顯示心功能顯著改善。 4、人參強(qiáng)心滴丸對(duì)心衰大鼠心肌細(xì)胞凋亡率的影響模型組與正常組比較，模型組心肌細(xì)胞凋亡率(即AP值)顯著高于正常組(P<0.05)。經(jīng)藥物治療后，各治療組與模型組比較，細(xì)胞凋亡率均明顯減小(P<0.01)。其中，低劑量組高于高劑量組(P<0

9、.05)，而陽性藥對(duì)照組與高低劑量組比較無明顯差異(P>0.05)。 5、人參強(qiáng)心滴丸對(duì)心衰大鼠心肌細(xì)胞增殖周期變化的影響模型組G<,0>/G<,1>期細(xì)胞百分率較正常組顯著升高(P<0.05)，而S期和G<,2>/M期細(xì)胞百分率均較正常組降低(P<0.05)。經(jīng)用藥干預(yù)后，高、低劑量組及對(duì)照組G<,0>/G<,1>期細(xì)胞百分率明顯低于模型組(P<0.01)，而S期和G<,2>/M期細(xì)胞百分率顯著高于模型組，(P<0.05或P<

10、0.01)。低劑量組G<,0>/G<,1>期和G<,2>/M期細(xì)胞百分率高于高劑量組(P<0.05)，但高劑量組與對(duì)照組之間各項(xiàng)指標(biāo)變化無明顯差異(P>0.05)。 與正常組比較，模型組心肌細(xì)胞PI值顯著降低(P<0.05)，經(jīng)用藥干預(yù)后，高、低劑量組和對(duì)照組心肌細(xì)胞PI值均較模型組顯著增高(P<0.01)，說明各治療組細(xì)胞增值速度高于模型組。與高劑量組比較，低劑量組大鼠心肌細(xì)胞PI值低于高劑量組。陽性藥對(duì)照組PI值高于低劑量組

11、(P<0.05)，高劑量組與陽性藥對(duì)照組之間比較無明顯差異(P>0.05)。 6、人參強(qiáng)心滴丸對(duì)實(shí)驗(yàn)性心衰大鼠心肌細(xì)胞Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)的影響模型組與正常組比較，心衰大鼠心肌細(xì)胞凋亡率明顯增高(P<0.01)，而Bax蛋白表達(dá)FI值、Bax/Bcl-2比值顯著升高(P<0.05)，Bcl-2蛋白表達(dá)FI值顯著降低(P<0.05)；經(jīng)用藥干預(yù)后，高、低劑量組和對(duì)照組Bax蛋白表達(dá)FI值、Bax/Bcl-2比值顯著降低(P<

12、0.05)，Bcl-2蛋白表達(dá)FI值顯著升高(P<0.05)，說明隨凋亡率增加，Bax蛋白表達(dá)量也增加，而Bcl-2蛋白表達(dá)量則隨凋亡率增加而減少。各用藥組中低劑量組Bax蛋白表達(dá)FI值和Bax/Bcl-2比值均高于高劑量組(P<0.05)；高劑量組與陽性藥對(duì)照組之間各項(xiàng)指標(biāo)無明顯差異(P>0.05)。 結(jié)論： 1、人參強(qiáng)心滴丸可明顯改善心衰大鼠心肌組織學(xué)的病變程度，表現(xiàn)為用藥后心肌細(xì)胞顆粒樣變性減輕或消失，心肌纖維排列