小鼠乳酸脫氫酶ldh酶聯(lián)免疫分析elisa

1、1小鼠乳酸脫氫酶（小鼠乳酸脫氫酶（LDHLDH）酶聯(lián)免疫分析（）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說(shuō)明書(shū)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)本試劑盒僅供研究使用。藥品名稱(chēng)：藥品名稱(chēng)：通用名：小鼠乳酸脫氫酶（LDH）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用目的：使用目的：本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中乳酸脫氫酶（LDH）含量。實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用間接法測(cè)定標(biāo)本中小鼠乳酸脫氫酶（LDH）水平。用純化的小鼠乳酸脫氫酶（LDH）抗體包被微孔板，制成固相抗體

2、，往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的乳酸脫氫酶（LDH）標(biāo)準(zhǔn)品和未知濃度的LDH待檢樣品，溫育后，加入生物素標(biāo)記的抗IgG抗體，再與鏈霉親和素HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的乳酸脫氫酶（LDH）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠乳酸脫氫酶（LDH）濃度。試劑盒組成試劑盒組

3、成120倍濃縮洗滌液50ml1瓶標(biāo)準(zhǔn)品S1（9IUL）0.5ml1瓶2鏈霉親和素HRP6ml1瓶標(biāo)準(zhǔn)品S2（6IUL）0.5ml1瓶3酶標(biāo)包被板12孔8條標(biāo)準(zhǔn)品S3（3IUL）0.5ml1瓶4生物素標(biāo)記的抗IgG抗體6ml1瓶標(biāo)準(zhǔn)品S4（1.5IUL）0.5ml1瓶5顯色劑A液6ml1瓶9標(biāo)準(zhǔn)品S5（0.75IUL）0.5ml1瓶6顯色劑B液6ml1瓶10密封袋1個(gè)7終止液6ml1瓶11封板膜3張8樣品稀釋液6ml1瓶12說(shuō)明書(shū)1份標(biāo)本

4、要求標(biāo)本要求1不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。2標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融操作步驟操作步驟1.根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)品孔、

5、待測(cè)樣品孔。然后在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl，在樣本反應(yīng)孔中先加入待測(cè)樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl（樣品最終稀釋度為5倍），蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。23.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用4.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)4次，拍干。5.加生物素標(biāo)記的抗IgG抗體：每孔加入生物素標(biāo)記的抗IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘6.洗滌：操作同4

6、。7.加鏈霉親和素HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。8.洗滌：操作同4。9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。計(jì)算計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐

7、標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值待入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)1試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡1530分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)

8、常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請(qǐng)先將樣本稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以稀釋倍數(shù)（5n）。5封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6本試劑不同批號(hào)組分不得混用。顯色劑B請(qǐng)避光保存。7嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9