半夏組織培養(yǎng)研究.pdf

1、半夏[Pinellia ternata(Thunb.) Briet.]是一種重要的傳統(tǒng)中藥材，具有鎮(zhèn)咳、祛痰、鎮(zhèn)痛、抗生育、抗腫癌、提高記憶之活性，具有很好的發(fā)展前景。 據(jù)統(tǒng)計(jì)，在558種中藥處方中，半夏被列為使用頻率最高的30種中藥的第22位，市場(chǎng)需求很大。但自然條件下，半夏主要靠珠芽、塊莖進(jìn)行無(wú)性繁殖，繁殖系數(shù)低，加上耕作制度的改革和化學(xué)除草劑的使用使其野生資源遭到嚴(yán)重破壞。另外半夏長(zhǎng)期無(wú)性繁殖過(guò)程中易感染病毒，其產(chǎn)量和藥用

2、成分含量均明顯下降。 本論文以半夏塊莖作為材料，探討了不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)及濃度對(duì)半夏塊莖及外植體的誘導(dǎo)效應(yīng)，建立了半夏組織培養(yǎng)快速繁殖體系、篩選出誘導(dǎo)疏松愈傷組織的培養(yǎng)基，從而為半夏藥用成分的測(cè)定及綜合開發(fā)利用奠定了基礎(chǔ)。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1、以半夏的塊莖為外植體，接種于附加不同生在調(diào)節(jié)物質(zhì)MS培養(yǎng)基上，均能產(chǎn)生愈傷組織。1.0mg/L2，4-D有利于愈傷組織的誘導(dǎo)；0.5mg/L IAA有利于胚狀體的產(chǎn)生，較適合用于小

3、塊莖的誘導(dǎo)；NAA的主要作用為誘導(dǎo)愈傷組織生根，MS+2.0mg/L NAA是誘導(dǎo)半夏塊莖外植體的生根培養(yǎng)基；MS+0.5mg/L KT是較適宜的塊莖誘導(dǎo)和增殖的培養(yǎng)基。 2、以半夏葉片、葉柄為外植體，接種于通過(guò)單因素誘導(dǎo)試驗(yàn)和正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)的不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)及濃度的培養(yǎng)基中，進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)。結(jié)果表明：低濃度的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素均有利于半夏外植體小塊莖的誘導(dǎo)，0.2mg/L IAA和0.5mg/L6-BA誘導(dǎo)率較高；當(dāng)濃度達(dá)到1.0

4、mg/L時(shí)，IAA誘導(dǎo)的葉片外植體能產(chǎn)生數(shù)量很多的小塊莖，但由于數(shù)目過(guò)多影響了小塊莖的萌發(fā)。KT、ZT先誘導(dǎo)出白色愈傷組織，再由白色愈傷組織分化出小塊莖從而減慢了小塊莖的萌發(fā)速度；當(dāng)濃度增至2.0mg/L時(shí)，2，4-D誘導(dǎo)產(chǎn)生大量被絨毛的粗根，NAA誘導(dǎo)產(chǎn)生致密的長(zhǎng)根，從而抑制了小塊莖的產(chǎn)生。通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)篩選出誘導(dǎo)半夏成苗最佳培養(yǎng)基：MS+0.5mg/L IAA+0.5mg/L KT+0.5mg/L6-BA。50天后對(duì)這種培養(yǎng)基上的再生

5、小植株進(jìn)行移栽，兩周后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，移栽成活率達(dá)95％以上。 3、采取兩因素和正交實(shí)驗(yàn)的方法，篩選最佳的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)配比的培養(yǎng)基誘導(dǎo)半夏的疏松愈傷組織。在兩因素生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)配比的試驗(yàn)中，3.0mg/L2，4-D與1.0mg/L6-BA誘導(dǎo)的愈傷組織狀態(tài)好，生長(zhǎng)速度較快，為疏松的愈傷組織；在正交實(shí)驗(yàn)中，將半夏的葉片和葉柄接種在附加1.0mg/L2，4-D+1.0mg/L KT+1.0mg/L6-BA的MS培養(yǎng)基上可誘導(dǎo)形成疏松愈傷組織